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一种测定磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性的电化学方法
| 专利名称： | 一种测定磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性的电化学方法 |
| 摘要： | 本发明公开一种测定磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性的电化学方法，属于电化学分析技术领域。本发明所述方法为首先选用导电性良好的碳浆电极，采用透析法对PEPC抗体进行纯化，之后将其固定在碳浆工作电极上，由于该抗体与磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的特异性结合，该传感器能快速识别并捕获植物总蛋白中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶。利用电化学方法可快速实现对磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性的高灵敏度检测；该检测方法具有灵敏度高，检测限低，选择性和重复性好等优点，可用于磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性的定量检测。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 云南;53 |
| 申请人： | 昆明理工大学 |
| 发明人： | 陈丽梅;郭红霞;孟清照 |
| 专利状态： | 有效 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201810058961.6 |
| 公开号： | CN108398477A |
| 分类号： | G01N27/48(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N27;G01N27/48 |
| 申请人地址： | 650093 云南省昆明市五华区学府路253号 |
| 主权项： | 1.一种测定磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性的电化学方法，其特征在于，包括以下步骤 ：（1）对碳浆印刷电极的工作电极进行活化，使工作电极表面产生羧基；（2）将步骤（1）得到的碳浆印刷电极用ddH2O冲洗后自然晾干，在工作电极上滴入PEPC抗体，4℃结合16h，用电极洗液和ddH2O交替冲洗，室温晾干，再滴加牛血清蛋白封闭活性位点，用电极洗液和ddH2O交替冲洗，即制得磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶电化学传感器；（3）将植物总蛋白样品滴加到步骤（2）得到的电化学传感器上，使蛋白与抗体充分结合，之后用电极洗液和ddH2O交替冲洗，以洗去非特异性结合的杂蛋白；（4）将步骤（3）得到的电化学传感器在反应液中反应3min后，使用循环伏安法测定电流大小；（5）将步骤（4）测得的电流值带入电流峰值与NADH浓度的线性关系式（y=0.0804x+0.8267）中，求得NADH的浓度，再依据酶活力单位的定义换算出酶活。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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