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一种从精液中分离提纯外泌体的方法
| 专利名称： | 一种从精液中分离提纯外泌体的方法 |
| 摘要： | 本发明提供了一种从精液中分离提纯外泌体的方法，本发明与常规的外泌体分离提取方法相比，删减300g、2000g的低转速离心步骤，尽量避免外泌体被粘性物质带入下一步离心的细胞沉淀中，减少外泌体的损失。采用两步稀释法，减少了外泌体的损耗，提高了其纯度。采用8％PEG6000过夜处理，使外泌体纯度得到进一步提升。所使用PBS均采用0.1μm滤器过滤处理，减少了外来杂质的带入。采取两步过滤法(0.22μm滤器过滤处理)，减少了较大粒径颗粒混入。通过该方法可以获得质量较高且纯度更加符合实验要求的精液来源外泌体。在对精液来源外泌体保质保量的前提下，最大限度的提高了其纯度。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 广东;44 |
| 申请人： | 中山大学附属第一医院;中山大学附属第六医院 |
| 发明人： | 邓春华;刘贵华;谢云;张弛;吕林艳;邓存灿 |
| 专利状态： | 有效 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201810154782.2 |
| 公开号： | CN108414334A |
| 代理机构： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 |
| 代理人： | 郝传鑫 |
| 分类号： | G01N1/34(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N1;G01N1/34 |
| 申请人地址： | 510000 广东省广州市中山二路58号 |
| 主权项： | 1.一种从精液中分离提纯外泌体的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用PBS对精液样本进行稀释；(2)将步骤(1)中稀释后的精液样本，在4℃条件下以4000g的转速离心，留取上清液，弃沉淀；(3)将步骤(2)得到的上清液在4℃条件下以12000g的转速离心，留取上清液，弃沉淀；(4)将步骤(3)得到的上清液用PBS稀释；(5)将步骤(4)稀释后的上清液用0.22μm滤器过滤处理；(6)将步骤(5)得到的上清液与PEG6000充分混合，使PEG6000终浓度为8wt％，再4℃过夜；(7)4℃过夜后，将步骤(6)得到的混合物在4℃条件下以12000g的转速离心，留取沉淀，弃上清；(8)将步骤(7)得到的沉淀用PBS重悬，在4℃条件下以100000g的转速离心；离心结束后，弃上清，留取沉淀；再将沉淀用PBS重悬，4℃条件下放置；(9)将步骤(8)得到的重悬液在4℃条件下以100000g的转速离心70分钟；离心结束后，弃上清，留取沉淀，该沉淀即为分离提纯所得的精液来源外泌体。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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