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原文传递 一种分离外泌体的方法
专利名称: 一种分离外泌体的方法
摘要: 本发明公开了一种分离外泌体的方法,该方法首先将微球与结合试剂、待分离的外泌体样本混合、孵育,形成微球‑外泌体复合物;去除未被微球吸附的上清,然后将微球‑外泌体复合物分散到洗脱液中,将外泌体从微球表面洗脱;去除微球,即为纯化得到的外泌体。本发明的方法分离得到的外泌体纯度高、得率高,且操作便捷、分离快速。
专利类型: 发明专利
国家地区组织代码: 上海;31
申请人: 上海交通大学
发明人: 古宏晨;刘冰;徐宏;方晓霞
专利状态: 有效
申请日期: 2019-05-23T00:00:00+0800
发布日期: 2019-09-13T00:00:00+0800
申请号: CN201910436318.7
公开号: CN110231207A
代理机构: 上海容慧专利代理事务所(普通合伙)
代理人: 于晓菁
分类号: G01N1/34(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址: 200240 上海市闵行区东川路800号
主权项: 1.一种分离外泌体的方法,其特征在于该方法包括如下步骤: 首先将微球与结合试剂、待分离的外泌体样本混合、孵育,形成微球-外泌体复合物; 去除未被微球吸附的上清,然后将微球-外泌体复合物分散到洗脱液中,将外泌体从微球表面洗脱; 去除微球,即为纯化得到的外泌体。 2.根据权利要求1所述的一种分离外泌体的方法,其特征在于包括如下步骤: (1)构建反应体系:将微球、结合试剂和预处理后的样品混匀; (2)孵育:将混匀后的反应体系在0-30℃下静置或混匀孵育10min~4h;然后去除上清液,得到微球-外泌体复合物; (3)洗脱:加入洗脱液,并将微球-外泌体复合物均匀分散于洗脱液中,洗脱微球上吸附的外泌体;然后去除微球,所得的上清液即为包含外泌体的溶液。 3.根据权利要求2所述的分离外泌体的方法,其特征在于: 其中步骤(1)中,微球粒径在100nm-30μm,表面带有亲水性功能基团,所述的亲水性功能基团为羧基、氨基、羟基或两性离子。 4.根据权利要求2所述的分离外泌体的方法,其特征在于: 其中结合试剂由亲水性聚合物、盐和pH缓冲液组成; 其中亲水性聚合物为聚乙二醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖、聚乙烯亚胺或聚乙烯吡咯烷酮、两性甜菜碱类化/聚合物中的一种或多种; 其中盐为钾盐或钠盐,优选的为钠盐,更具体的说是NaCl; 其中pH缓冲液为:PBS、Tris-HCl或柠檬酸盐缓冲液。 5.根据权利要求4所述的分离外泌体的方法,其特征在于: 亲水性聚合物为聚乙二醇,分子量在2000~12000。 6.根据权利要求5所述的分离外泌体的方法,其特征在于: 聚乙二醇的分子量为8000。 7.根据权利要求2所述的分离外泌体的方法,其特征在于: 其中样本为细胞培液以及血浆、血清、脑脊液、淋巴液、乳汁、尿液或唾液等各种体液中; 其中预处理后的样本,是指将样本经过低速差速离心,然后过滤的预处理。 8.根据权利要求7所述的分离外泌体的方法,其特征在于: 对样本的预处理为:对样本进行低速差速离心,包含300g离心5min、2000g离心10min和10000g离心30min;离心之后,用0.22μm滤膜的过滤。 9.根据权利要求2所述的分离外泌体的方法,其中步骤(2)中: 微球的工作浓度为0.01mg/ml-3mg/ml; 亲水性聚合物的工作浓度在30mg/ml-200mg/ml; 盐的工作浓度范围在0.01-2M。 10.根据权利要求2所述的分离外泌体的方法,其中步骤(3)中,洗脱液为PBS、Tris-HCl、柠檬酸盐缓冲液或去离子水。 11.一种分离外泌体的方法,其特征在于包括如下步骤: (1)构建反应体系:将微球、结合试剂和预处理后的样品混匀; (2)孵育:将混匀后的反应体系在0-30℃下静置或混匀孵育10min~4h;然后去除上清液,得到微球-外泌体复合物; (3)洗脱:加入洗脱液,并将微球-外泌体复合物均匀分散于洗脱液中,洗脱微球上吸附的外泌体;然后去除微球,所得的上清液即为包含外泌体的溶液; (4)二次分离纯化:步骤(3)得到的外泌体溶液作为第二次分离纯化的样本,重复步骤(1)-(3),得到所需的包含外泌体的溶液。
所属类别: 发明专利
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