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一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒及方法
| 专利名称： | 一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒及方法 |
| 摘要： | 本发明属于植物生物技术领域，涉及一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒及方法。先提供一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒，包括：花柱固定液试剂A，花柱洗涤液试剂B，微丝染料试剂C和胼胝质免疫荧光试剂D。再应用所述试剂盒标记微丝细胞骨架，步骤为：1)取授粉的花柱；2)用花柱固定液试剂A对花柱固定；3)用花柱洗涤液试剂B对花柱洗涤；4)用微丝染料试剂C和胼胝质免疫荧光试剂D的混合溶液对花柱染色；5)对花柱滴加抗荧光猝灭剂，在激光共聚焦显微镜下观察花柱中花粉管微丝细胞骨架。本发明所述试剂盒和方法实现了快速、灵敏、准确、简便地观察苹果花粉管内微丝骨架的结构与排列方式。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 北京;11 |
| 申请人： | 中国农业大学 |
| 发明人： | 李天忠;杨清;顾钊宇;李威;李洋;于杰;刘春生 |
| 专利状态： | 有效 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201810748383.9 |
| 公开号： | CN109061133A |
| 代理机构： | 北京卫平智业专利代理事务所(普通合伙) 11392 |
| 代理人： | 谢建玲;郝亮 |
| 分类号： | G01N33/533(2006.01)I;G01N21/64(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/533;G01N21/64 |
| 申请人地址： | 100193 北京市海淀区圆明园西路2号 |
| 主权项： | 1.一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒，其特征在于，包括：花柱固定液试剂A，花柱洗涤液试剂B，微丝染料试剂C和胼胝质免疫荧光试剂D；所述花柱固定液试剂A包括：多聚甲醛、EGTA、PIPES、MgCl2和蔗糖；所述多聚甲醛的质量百分比为10％，EGTA的浓度配比为6mmol/L，PIPES的浓度配比为80mmol/L，MgCl2的浓度配比为6mmol/L，蔗糖的质量百分比为18％；所述花柱固定液试剂A的溶剂为双蒸水；所述花柱洗涤液试剂B包括：Tris‑HCl、NaCl和Tween；每1L花柱洗涤液试剂B中包括：100mL的Tris‑HCl、7g的NaCl和20mL的Tween，所述Tris‑HCl的pH为7；所述花柱洗涤液试剂B的溶剂为双蒸水；所述微丝染料试剂C包括：NP‑40、Alex‑561‑phalloidin、Tris‑HCl、NaCl和蔗糖；所述NP‑40的体积百分比为1％，所述Alex‑561‑phalloidin浓度配比为200nmol/L，所述Tris‑HCl的浓度配比为100mmol/L，所述Tris‑HCl的pH为5.0，所述NaCl的浓度配比为300mmol/L，所述蔗糖的质量百分比为18％；所述微丝染料试剂C的溶剂为双蒸水；所述胼胝质免疫荧光试剂D包括：NP‑40、Cellulose、PectolyaseY‑23、Tris‑HCl、NaCl、甘氨酸、一抗anti‑β‑1,3‑glucenase和二抗FITC‑anti‑mouse‑lgG；所述NP‑40的体积百分比为1％，所述Cellulose的质量百分比为3.0％，所述PectolyaseY‑23的质量百分比为0.3％，所述Tris‑HCl的浓度配比为100mmol/L，所述Tris‑HCl的pH为5.0，所述NaCl的浓度配比为300mmol/L，所述甘氨酸的浓度配比为120mmol/L，所述一抗anti‑β‑1,3‑glucenase的体积比为1:300，所述二抗FITC‑anti‑mouse‑lgG的体积比为1:300；所述胼胝质免疫荧光试剂D的溶剂为双蒸水。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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