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一种基于适配子检测N-羟乙酰神经氨酸含量的方法
| 专利名称： | 一种基于适配子检测N-羟乙酰神经氨酸含量的方法 |
| 摘要： | 本发明属于分子生物检测技术领域，特别涉及一种基于适配子检测N‑羟乙酰神经氨酸含量的方法，采用N‑羟乙酰神经氨酸‑载体蛋白的偶联物为检测抗原，生物素化修饰的适配子为检测探针，利用包被抗原与检测样品中游离的N‑羟乙酰神经氨酸竞争结合特异性检测探针作为反应模式，经HRP标记的链酶亲和素催化底物显色，测得吸光度值，实现检测样品中N‑羟乙酰神经氨酸的定量测定。本发明检测方法成本低廉，可快速、简便、灵敏地测定尿液、血清及动物源性食品牛奶中的N‑羟乙酰神经氨酸的含量，对肿瘤的诊断、预防、风险评估以及动物源性食品污染领域提供研究素材。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 吉林;22 |
| 申请人： | 吉林大学 |
| 发明人： | 卢士英;巩晟;任洪林;胡盼;林超;田瑞云;李岩松;柳增善;周玉 |
| 专利状态： | 有效 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201810531160.7 |
| 公开号： | CN108709989A |
| 代理机构： | 西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙) 61223 |
| 代理人： | 俞晓明 |
| 分类号： | G01N33/53(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/53 |
| 申请人地址： | 130012 吉林省长春市前进大街2699号 |
| 主权项： | 1.一种基于适配子检测N‑羟乙酰神经氨酸含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1，准备检测样品，所述检测样品为尿液、血液、牛奶中的其中一种；S2，设计合成适配子，将生物素化后的适配子配制成10μmol/L的适配子溶液，然后用结合液以体积比1：250‑4000稀释，得适配子反应探针溶液，该适配子的核酸序列为：5’‑tggtcccatgtacgccgcggtgtacctccgcgtgtacgctactttctgtgcgtgctgagcgtgaattcgc‑3’；S3，将S1中检测样品加入到抗原预包被处理后的微孔中，以每个微孔中的检测样品为基础样品，然后加入与基础样品等体积量的S2中的适配子反应探针溶液，混匀后37℃孵育1h；S4，用洗涤液洗S3的微孔3‑5次，然后加入相当于S3中基础样品2倍体积量的用结合液稀释了1000倍的HRP标记链酶亲和素，37℃孵育0.5‑1.5h；S5，用洗涤液洗S4的微孔3‑5次，然后加入相当于S3中基础样品2倍体积量的邻苯二胺底物溶液，放置10‑15min，然后加入相当于S3中基础样品等体积量的2mol/L的H2SO4，振荡混匀，得待检溶液；S6，将S5中待检测溶液置于酶标仪上读取492nm波长下的吸光度值数，再对照标准曲线计算得检测样品中N‑羟乙酰神经氨酸含量。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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