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一种检测外周血神经元中磷酸化α突触核蛋白阳性细胞占比的方法
| 专利名称： | 一种检测外周血神经元中磷酸化α突触核蛋白阳性细胞占比的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种检测外周血神经元中磷酸化α突触核蛋白阳性细胞占比的方法，所述方法包括如下步骤：(1)取外周血血样；(2)对血样中红细胞进行裂解；(3)分离出含有稀有细胞和少量白细胞的混合细胞群；(4)分选富含神经元的细胞群；(5)铺板；(6)特异性标记；(7)利用激光共聚焦显微镜对特异性标记的细胞进行荧光激发，并拍照保存数据；(8)利用image J图像分析统计软件对拍照结果进行分析，得出外周血神经元中磷酸化α突触核蛋白阳性细胞占比。本发明通过免疫荧光化学方法对外周血神经元中的磷酸化α突触核蛋白所占比例进行检测，本发明方法快速、准确、灵敏度高。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 云南;53 |
| 申请人： | 云南淘谜生物科技有限公司 |
| 发明人： | 王振纲;李威 |
| 专利状态： | 有效 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201810585108.X |
| 公开号： | CN108801996A |
| 代理机构： | 无锡华源专利商标事务所(普通合伙) 32228 |
| 代理人： | 聂启新 |
| 分类号： | G01N21/64(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N21;G01N21/64 |
| 申请人地址： | 650032 云南省昆明市高新区科高路新光巷285号沃霖大厦第七层 |
| 主权项： | 1.一种检测外周血神经元中磷酸化α突触核蛋白阳性细胞占比的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)取外周血至少100μL；(2)在步骤(1)获得的血液样本中加入红细胞裂解液，待溶液变清亮时，离心，收集细胞沉淀备用；(3)将包被有能与白细胞CD45抗原特异性结合的磁珠，与步骤(2)所得的细胞沉淀混合，进行孵育，利用吸附柱洗脱特异性结合的磁珠粒‑白细胞混合体，得到含有稀有细胞和少量白细胞的混合细胞群；(4)用Anti‑CD24抗体孵育步骤(3)所得的混合细胞群，运用流式细胞分选技术或微流体细胞分选系统富集神经元，制得富含神经元的细胞群；(5)将步骤(4)制得的富含神经元的细胞群铺板于预先用多聚鸟氨酸‑层粘连蛋白处理的盖玻片上；(6)将步骤(5)处理的盖玻片于室温下静置1h，然后用免疫荧光细胞化学方法对4',6‑二脒基‑2‑苯基吲哚、神经元细胞核抗原、P(S129)‑α‑syn进行特异性标记；(7)利用激光共聚焦显微镜对特异性标记的细胞进行荧光激发，并拍照保存数据；(8)利用image J图像分析统计软件对拍照结果中P(S129)‑α‑syn阳性细胞在神经元中的比例进行统计分析，得出外周血神经元中磷酸化α突触核蛋白阳性细胞占比。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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