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原文传递一种检测阿尔茨海默症标志物的电化学免疫传感器的制备方法及应用

专利名称：	一种检测阿尔茨海默症标志物的电化学免疫传感器的制备方法及应用
摘要：	本发明涉及一种检测阿尔茨海默症标志物的电化学免疫传感器的制备方法及应用，属于新型纳米功能材料、免疫分析和生物传感器领域。制备的金纳米粒子功能化的还原氧化石墨烯作为基底材料，提高阿尔茨海默症标志物捕获抗体的固载量，并有效加速电极表面的电子传递速率；制备AuCu_xO@CeO₂复合纳米材料作为信号放大标签固载检测抗体；通过Au NPs、CeO₂与Cu_xO的协同作用，复合材料进一步提高催化效率；制备的电化学免疫传感器，可用于阿尔茨海默症相关标志物的检测。具有特异性强，灵敏度高，检测限低，具有重要的科学意义和应用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东理工大学
发明人：	李月云;高增强;张春燕;张栓;李新进;徐振;刘青;王平;陈志伟;董云会
专利状态：	有效
申请号：	CN201811315614.3
公开号：	CN109115855A
分类号：	G01N27/327(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	255086 山东省淄博市高新技术开发区高创园A座313室
主权项：	1.一种检测阿尔茨海默症标志物的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：1) 金纳米粒子功能化的还原氧化石墨烯的制备取5 ~ 20 mg氧化石墨烯溶解在10 mL的超纯水中，超声60 min后，加入200 µL、1%的HAuCl4和4 mL、 50 wt% 硫瑾溶液，在室温下搅拌12 h，超纯水离心洗涤三次，所得固体于60˚C真空冷冻干燥机内干燥10 ~ 14 h，制得金纳米粒子功能化的还原氧化石墨烯；2) Ab2‑AuCuxO@CeO2孵化物溶液的制备取0.4 ~ 0.6 g的Ce(NO3)3·6H2O溶解在1 mL的混合溶剂中，加入15 mL的乙二醇，搅拌60 min，将混合液转移到30 mL的聚四氟乙烯反应釜中，加热至150 ~ 200℃，反应200 min；冷却至室温，离心分离，所得沉淀依次用超纯水和无水乙醇洗涤三次,在50 °C的真空干燥箱内干燥12 h，制得介孔CeO2；所述混合溶剂，是超纯水和无水乙醇按体积比1:1混合制得；取1 ~ 2 mg上述制得的CeO2分散在20 mL的超纯水中，超声1 h后，加入200 uL、 1 wt%的HAuCl4, 搅拌3min，然后将200 uL、1 wt%的柠檬酸钠溶液加入上述混合液中，搅拌5 min，加入15~25 mg 乙酸铜，搅拌15 min，将200 ~ 600 uL、 0.075 wt%的硼氢化钠溶液加入其中，搅拌3 ~ 6h，所得沉淀用超纯水洗涤三次；在45 °C的真空干燥箱内干燥12 h，得到AuCuxO@CeO2；所述0.075wt %的硼氢化钠溶液，是将6 mg 硼氢化钠溶解在8 mL、 1 wt%的柠檬酸钠溶液中所得；将2 ~ 6 mg的AuCuxO@CeO2分散到2 mL、 pH 7.4磷酸盐缓冲溶液中，加入2 mL、20 µg/mL的阿尔茨海默氏病标志物检测抗体Ab2溶液，4℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h；离心洗涤，分散在4 mL、1.0 wt%的pH 7.0 牛血清白蛋白溶液中，制得Ab2‑AuCuxO@CeO2检测抗体孵化物溶液，4 ℃冰箱中储存以备用；3）电化学免疫传感器的制备（1）将直径为3 ~ 5 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；（2）取6 µL、0.5 ~ 2.0 mg/mL的金纳米粒子功能化的还原氧化石墨烯溶液滴加到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，晾干；（3）继续将6 µL、5 ~ 15 µg/mL的疾病标志物捕获抗体Ab1滴加到电极表面，超纯水冲洗，在4 ℃冰箱中干燥；（4）继续将3 µL、0.1 ~ 1.0 %的BSA溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，在4 ℃冰箱中晾干；（5）滴加6 µL、0.0001 ~ 50 ng/mL的疾病标志物抗原溶液，超纯水冲洗电极表面，在4℃冰箱中干燥；（6）将6 µL、1~ 3 mg/mL的疾病标志物检测抗体孵化物Ab2‑AuCuxO@CeO2溶液，滴涂于电极表面，置于4℃冰箱中孵化60 min，超纯水冲洗电极表面，在4℃冰箱中晾干，制得一种检测阿尔茨海默症标志物的电化学免疫传感器。
所属类别：	发明专利