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原文传递一种检测阿尔茨海默症标志物的电化学免疫传感器、其制备方法及应用

专利名称：	一种检测阿尔茨海默症标志物的电化学免疫传感器、其制备方法及应用
摘要：	本发明涉及一种检测阿尔茨海默症标志物的电化学免疫传感器、其制备方法及应用，具体包括以下几个步骤：①铂碳电极的预处理，通过电沉积的方式将氧化石墨烯量子点沉积到铂碳电极上；②制备的金双锥包铂纳米结构作为基底材料，并将之通过电泳沉积法沉积到氧化石墨烯量子点表面，从而进一步提高阿尔茨海默症标志物捕获抗体的固载量，并加速电极表面的电子传递速率；③制备的AuPd‑PDA纳米复合材料作为信号放大标签固载检测抗体；通过基底材料与AuPd‑PDA复合纳米材料的协同作用，进一步提高传感器的灵敏度；制备的电化学免疫传感器，可用于阿尔茨海默症标志物的检测；具有特异性强、灵敏度高、检测限低的特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	黄河科技学院
发明人：	刘一镳;何广莉;牛鹏飞;侯梦丹;秦伟鹏;张平平;张守仁;杨保成
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910399480.6
公开号：	CN110006976A
代理机构：	郑州联科专利事务所(普通合伙)
代理人：	时立新;张丽
分类号：	G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	450005 河南省郑州市二七区航海中路94号
主权项：	1.一种AuPd-PDA纳米结构，其特征在于，通过下述步骤制得：（1）取 ZnO纳米棒超声分散于Tris-HCl缓冲液中，随后加入多巴胺盐酸盐，60 ±5℃搅拌3.5~4.5h；离心分离，收集固体得到ZnO@PDA纳米棒；最后，将ZnO@PDA纳米棒分散于超纯水中，加入NH4Cl 溶液60 ±5℃搅拌0.5~1.5h用以刻蚀ZnO纳米棒，得到PDA纳米管，ZnO纳米棒与多巴胺盐酸盐的质量比为1:1；（2）将0.4-2 mL HAuCl4 和 0.1-0.5 mL H2PdCl4 加入煮沸的PDA纳米管水溶液中，搅拌，然后加入抗坏血酸溶液，反应50~70分钟后，离心分离，收集固体得AuPd-PDA纳米结构。 2.根据权利要求1所述的AuPd-PDA纳米结构，其特征在于，所述ZnO纳米棒的具体制备过程如下：将硝酸锌和氢氧化钠溶解在30 mL超纯水中，使得硝酸锌的浓度为0.5M，氢氧化钠浓度为10M；然后依次加入25 mL 乙醇和5 mL乙二胺；然后180 ℃水热反应 20 h，收集固体，即得。 3.根据权利要求1所述的AuPd-PDA纳米结构，其特征在于，所述步骤（1）中ZnO纳米棒的用量为10mg，Tris-HCl的浓度为10mM、用量为20mL，NH4Cl 溶液的浓度为0.1M，用量为10mL。 4.一种利用权利要求1所述的AuPd-PDA纳米结构制备检测阿尔茨海默症标志物的电化学免疫传感器的方法，其特征在于，制备步骤如下：（1）将ApoE4检测抗体与AuPd-PDA纳米结构混合，超声50~70min后，离心分离，可得检测抗体修饰的AuPd-PDA纳米结构，分散至PBS缓冲液，记为Ab2-AuPd-PDA溶液，备用；（2）铂碳电极的预处理：通过电沉积的方法将氧化石墨烯量子点沉积到铂碳电极表面得到一层氧化石墨烯颗粒；（3）然后通过电泳沉积的方法将金双锥包铂纳米结构沉积在氧化石墨烯颗粒上，用超纯水冲洗后，晾干；（4）步骤（3）得到的电极表面滴加捕获抗体，孕育，然后用超纯水冲洗后，晾干；（5）滴加的BSA溶液封闭非特异性结合位点，孕育，然后用超纯水冲洗电极表面，晾干；（6）滴加0.01-20000ng/mL的疾病标志物ApoE4溶液，孕育，用超纯水冲洗电极表面，晾干；（7）将Ab2-AuPd-PDA溶液滴涂于电极表面，孵化，用超纯水冲洗电极表面后，晾干，制得一种检测阿尔茨海默症标志物的电化学免疫传感器。 5.根据权利要求4所述制备检测阿尔茨海默症标志物的电化学免疫传感器的方法，其特征在于，所述金双锥包铂纳米结构，通过下述步骤制得：种子生长法制备金纳米双锥溶液，将2mL的金纳米双锥溶液离心，将沉淀分散于2mL、0.08M CTAC中，依次加入10μL、0.01M AgNO3、5μL、0.1M抗坏血酸后混匀，60℃摇床放置5小时，离心后，分散于2mL、0.005M CTAB中，再依次加入2-30μL、0.001M H2PtCl4、2-30μL、0.01M抗坏血酸混匀后，搅拌反应8~12h，离心后，分散于2mL水中可得金双锥包铂纳米结构。 6.根据权利要求4所述制备检测阿尔茨海默症标志物的电化学免疫传感器的方法，其特征在于，步骤（1）的具体过程如下：将100μL、1mg/mL ApoE4的检测抗体与1mL、1mg/mLAuPd-PDA纳米结构混合，超声1h后，离心分离，可得检测抗体修饰的AuPd-PDA纳米结构，分散到1mL、10mM PBS缓冲液中，备用。 7.根据权利要求4所述制备检测阿尔茨海默症标志物的电化学免疫传感器的方法，其特征在于，步骤（2）中氧化石墨烯量子点的浓度为1mg/mL，在-2.8V沉积5min；所述步骤（3）中在-1.0V沉积15min；所述步骤（4）中捕获抗体的浓度为100μg/mL，用量为10μL，所述步骤（5）中BSA溶液浓度为1mg/mL 、用为10μL；所述步骤（6）疾病标志物ApoE4溶液的用量为5μL，所述步骤（7）中Ab2-AuPd-PDA溶液浓度为100 μg/mL，用量为5μL。 8.根据权利要求4所述制备检测阿尔茨海默症标志物的电化学免疫传感器的方法，其特征在于，所述孕育或孵化是指在37℃保持1h，所述，晾干是在4℃冰箱中进行。 9.权利要求4所述的方法制得的检测阿尔茨海默症标志物的电化学免疫传感器。 10.权利要求4所述的电化学免疫传感器在检测阿尔茨海默症标志物中的应用，其特征在于，包括如下步骤：（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，Ag/AgCl电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的传感器为工作电极，在20 mL、10 mM的pH为5.5-7.8的磷酸缓冲液中进行测试；（2）用时间-电流法检测过氧化氢的电流响应值，输入电压为-0.2V，取样间隔为0.1s，运行时间600 s；（3）当背景电流稳定后，每隔50s向20 mL、10 mM的pH为5.5-7.8的磷酸缓冲液中滴入20μL 1M的过氧化氢溶液，记录电流变化。
所属类别：	发明专利