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原文传递一种蝴蝶兰冰冻切片处理方法

专利名称：	一种蝴蝶兰冰冻切片处理方法
摘要：	本申请植物组织解剖技术领域，具体涉及一种蝴蝶兰冰冻切片处理方法。该方法包括包括组织采样、组织预处理、液氮快速冷冻、冷台固定、冰冻切片、展片、染色、观察和拍照等操作步骤。初步应用效果表明，利用本申请所提供冷冻切片方法进行实际操作时，可获得组织显微结构较完整的切片，并可获得较清晰的蝴蝶兰叶、根、花器官等组织切片图，从而为蝴蝶兰组织结构的观察和研究、以及原位杂交及亚细胞定位等分子技术的应用奠定基础。本申请相关预处理方式的改进，较好降低了冷冻处理过程中植物组织冰晶产生几率。本申请也为其他兰科植物组织的冷冻切片处理方法提供了较好借鉴和参考。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	郑州师范学院
发明人：	蒋素华;许申平;梁芳;张燕;袁秀云;李艳辉;王默霏;周一冉;马杰;崔波
专利状态：	有效
申请号：	CN201811009234.7
公开号：	CN109238797A
代理机构：	郑州联科专利事务所(普通合伙) 41104
代理人：	时立新
分类号：	G01N1/28(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	450044 河南省郑州市惠济区英才街6号
主权项：	1.一种蝴蝶兰冰冻切片处理方法，其特征在于，该方法包括如下处理步骤：（1）待处理组织取样，并进行预处理对目标组织进行取样，并进行整形处理，切成合适尺寸小块；所述目标组织具体为蝴蝶兰幼苗期的叶片或气生根，或者生长良好盛花期的花柄、花萼、唇瓣或合蕊柱组织；对整形处理后组织样品，利用含蔗糖保护液进行预处理；所述含蔗糖保护液中，蔗糖浓度为4~16%；具体预处理方式为：将蝴蝶兰叶片组织样品置于蔗糖‑PBS保护液中处理20~40min，然后将所得材料再用含有相同蔗糖浓度的磷酸缓冲液浸洗处理；将气生根组织样品置于蔗糖‑PBS保护液中处理20~40min，然后将所得材料再用含有相同蔗糖浓度的磷酸缓冲液浸洗处理；将花器官组织中的花柄、花萼、唇瓣或合蕊柱样品置于蔗糖‑PBS保护液中处理30~60min，将所得材料再用含有相同蔗糖浓度的磷酸缓冲液浸洗处理；（2）冷冻处理，并进行包埋处理将步骤（1）中蔗糖处理后组织样品置于液氮中，液氮速冻20~30s；然后，在‑15 ~ ‑25℃条件下，包埋15~30min；（3）冷冻切片将步骤（2）中包埋处理样品切片操作时，各组织切片厚度均为10~20μm。
所属类别：	发明专利