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原文传递一种菠萝蜜果肉的冰冻切片方法

专利名称：	一种菠萝蜜果肉的冰冻切片方法
摘要：	本发明公开了一种菠萝蜜果肉的冰冻切片方法，包括利用蔗糖‑FAA固定液固定处理菠萝蜜果肉，再利用蔗糖的磷酸缓冲液浸洗是对固定的样品组织进行渗透保护。置于甘油中，并真空抽气，经培养箱培养后利用混合包埋剂共同处理菠萝蜜果肉样品，将包埋好的样品置于液氮中速冻，将速冻好的样品置于冷冻箱中回温，切片、染色。该发明各个步骤紧密联系，相互协同作用，对现有的冰冻切片法操作步骤进行了优化，减少了实验步骤和节省实验时间，减少了菠萝蜜果肉细胞冰晶的产生，减少细胞的破碎，保证了细胞结构和组织结构的完整性，能够获得清晰的果肉组织切片图。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	海南;46
申请人：	海南省农业科学院热带果树研究所
发明人：	赵亚;范鸿雁;冯学杰;胡福初;王祥和;郭利军;罗志文;陈哲
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-04T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910831751.0
公开号：	CN110441084A
代理机构：	北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	赵蕊红
分类号：	G01N1/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	571100海南省海口市琼山区兴丹路14号
主权项：	1.一种菠萝蜜果肉的冰冻切片方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)取新鲜的菠萝蜜果肉切成小块，并将小块果肉组织置于含有浓度为18～23％的蔗糖的FAA固定液中处理25～35min，再将固定处理后的果肉组织用含有浓度为18～23％的蔗糖的磷酸缓冲液浸洗20～30min； (2)将浸洗后的果肉组织置于甘油中，并真空抽气40～60min； (3)将真空抽气后的果肉组织置于培养箱中培养，再利用蔗糖溶液和OTC的混合包埋剂进行包埋20～40min； (4)将包埋好的果肉组织置于液氮中速冻35～45s； (5)将速冻好的果肉组织置于冷冻箱中回温0.8～1.2h，再进行切片； (6)向切片材料滴加番红水溶液染色，再将切片浸泡在蒸馏水中5～10s，洗涤材料2～3次，滴加180～220uL吐温-20于切片材料表面，加盖玻片。 2.根据权利要求1所述的一种菠萝蜜果肉的冰冻切片方法，其特征在于，所述步骤(1)中，磷酸缓冲液的浓度为8～12mmol/L。 3.根据权利要求1所述的一种菠萝蜜果肉的冰冻切片方法，其特征在于，所述步骤(2)中，将浸洗后的果肉组织置于浓度为10～20％的甘油中，并真空抽气40～60min。 4.根据权利要求3所述的一种菠萝蜜果肉的冰冻切片方法，其特征在于，所述步骤(2)中，将浸洗后的果肉组织置于浓度为15％的甘油中，并真空抽气50min。 5.根据权利要求1所述的一种菠萝蜜果肉的冰冻切片方法，其特征在于，所述步骤(3)中，培养温度为20～25℃，培养时间为1～1.5h。 6.根据权利要求1所述的一种菠萝蜜果肉的冰冻切片方法，其特征在于，所述步骤(3)中，蔗糖溶液与OCT包埋剂按照体积比为0.8～1.2：0.8～1.2的比例进行混合。 7.根据权利要求1所述的一种菠萝蜜果肉的冰冻切片方法，其特征在于，所述步骤(4)中，速冻温度为-190～-210℃。 8.根据权利要求1所述的一种菠萝蜜果肉的冰冻切片方法，其特征在于，所述步骤(5)中，切片温度为-18～-21℃，切片厚度为7～12μm。 9.根据权利要求1所述的一种菠萝蜜果肉的冰冻切片方法，其特征在于，所述步骤(6)中，向切片材料滴加0.5～1.5％番红水溶液染色32～40min。
所属类别：	发明专利