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一种检测DNA糖基化酶UDG的荧光生物传感器及其制备方法
| 专利名称： | 一种检测DNA糖基化酶UDG的荧光生物传感器及其制备方法 |
| 摘要： | 本发明涉及生物传感器技术领域，特别涉及基于聚合酶协助反馈滚环扩增和内切酶放大荧光法检测DNA糖基化酶UDG的荧光生物传感器。为了解决以上现有技术中检测UDG的方法特异性和灵敏度都比较低的问题。一种基于反馈滚环扩增技术检测UDG的生物传感器，将phi29聚合酶、核酸内切酶IV的配合实现滚环放大作用，以及荧光基团与猝灭基团的荧光共振能量转移，均相反应混合液。制备方法：环形模板及复合探针的构建；反馈滚环放大信号、荧光检测；利用了UDG酶对碱基U的特异性水解，利用这种特殊反应可以精准地测定UDG，同时还可以避免干扰的发生；利用核酸内切酶Ⅳ循环放大，实现信号放大的作用。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 山东;37 |
| 申请人： | 济南大学 |
| 发明人： | 黄加栋;王敬锋;刘素;王玉;宋晓蕾;张雪;王海旺;赵一菡;瞿晓南;张儒峰 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请号： | CN201811621278.5 |
| 公开号： | CN109444105A |
| 代理机构： | 济南泉城专利商标事务所 37218 |
| 代理人： | 李桂存 |
| 分类号： | G01N21/64(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N21 |
| 申请人地址： | 250022 山东省济南市市中区南辛庄西路336号 |
| 主权项： | 1.一种检测DNA糖基化酶UDG的荧光生物传感器，其特征在于，包括目标物UDG、复合探针I、复合探针II、phi29 DNA 聚合酶、核酸内切酶IV、dNTP、10×buffer缓冲液；所述的复合探针I由U‑DNA与环状模板通过碱基互补配对结合形成；所述的复合探针II由S‑DNA与环状模板通过碱基互补配对结合形成；所述的环状模板由线性挂锁探针C‑DNA与连接探针L‑DNA结合，在T4 DNA连接酶的作用下，形成环形模板‑连接引物的复合体，当有核酸外切酶I和外切酶III存在时，对引物进行消化，从而形成环形模板；所述的碱基序列如下：U‑DNA序列如SEQ No.1所示；线性挂锁探针C‑DNA序列如SEQ No.2所示；连接探针L‑DNA序列如SEQ No.3所示；S‑DNA序列如SEQ No.4所示；所述的U‑DNA的5’端第41和42位碱基之间有个修饰位点U，代表尿嘧啶碱基；U‑DNA的3’端修饰Inverted dT即反向dT用于抑制核酸外切酶的降解作用；所述的C‑DNA中的5’端修饰磷酸基团；所述的S‑DNA的5’端第41和42位碱基之间修饰了Dabcyl淬灭基团，然后还有个四氢呋喃修饰位点，即无嘌呤无嘧啶位点；第45和46位碱基之间有修饰了FAM荧光基团；3’端修饰的Inverted dT即反向dT用于抑制核酸外切酶的降解作用。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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