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原文传递一种检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的生物传感器及其制备方法

专利名称：	一种检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的生物传感器及其制备方法
摘要：	本发明涉及生物传感器技术领域，特别涉及基于纳米金DNA分子机器与表面增强拉曼散射的生物传感器。为了解决以上现有技术中检测UDG活性的方法特异性和灵敏度都比较低、成本高的问题。一种基于DNA分子机器表面增强拉曼散射检测UDG活性的生物传感器，将纳米金分子机器与表面增强拉曼相结合，均相反应混合液。制备方法：合成金纳米粒子；将Hairpin Probe和Track DNA以及拉曼染料修饰到金纳米粒子表面；将标记的纳米金溶液与均相反应溶液混合。利用了内切酶IV的特异性切割实现DNA分子机器开启，利用表面增强拉曼检测实现了高灵敏性检测；利用外切酶Ⅲ，实现了DNA分子机器的循环，起到了信号放大的作用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南大学
发明人：	王玉;张曼如;李莎莎;刘素;黄加栋;张儒峰;赵一菡;瞿晓南;孙文玉;王业茹
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-10T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201910022818.6
公开号：	CN109752362A
代理机构：	济南泉城专利商标事务所
代理人：	李桂存
分类号：	G01N21/65(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	250022 山东省济南市市中区南辛庄西路336号
主权项：	1.一种检测尿嘧啶-DNA糖基化酶的生物传感器，其特征在于，包括纳米金溶液、Hairpin Probe、Track DNA、拉曼染料、拉曼染料、均相反应液；所述的Hairpin Probe序列如SEQ No.1所示；所述的Track DNA序列如SEQ No.2所示；所述的DNA序列中，Hairpin Probe和Track DNA的5’端修饰-SH。 2.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述的均相反应液，包括内切酶IV、外切酶Ⅲ、待测物UDG、PBS。 3.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述的内切酶IV浓度为1 U/mL，所述的外切酶Ⅲ浓度为10U/mL，待测物UDG的浓度为1 U/mL。 4.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述的PBS为10mM Tris-HCL、50mMNaCl、10mM MgCl2、1mM DTT，pH=7.9。 5.权利要求1-4任一所述的生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备纳米金溶液；（2）将Hairpin Probe、Track DNA及拉曼染料修饰到金纳米粒子表面，得到修饰后的纳米金溶液；（3）将修饰后的的纳米金溶液与均相反应溶液混合。 6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）中纳米金溶液的浓度为1 nM。 7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（2），包括以下步骤： S1 向纳米金溶液中边搅拌边加入拉曼染料溶液； S2 加入修饰了-SH的底物探针 Hairpin Probe and Track DNA，混合均匀； S3 按照1μL/min的速度加入50 μL PB缓冲液，搅拌均匀，1μL/min的速度加入27 μLPBS缓冲液，4 ℃放置48 h； S4 按照1μL/min的速度加入62μL PBS缓冲液，搅拌均匀，4 ℃放置； S5加入灭菌水洗脱未标记上的DNA链，4 ℃保存待用。 8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（3）的反应条件为37℃，反应时间是1h。 9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（3）中拉曼染料的终浓度为0.5-3.0μM。
所属类别：	发明专利