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一种液质联用测定血浆中呋塞米浓度的方法
| 专利名称： | 一种液质联用测定血浆中呋塞米浓度的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种液质联用测定血浆中呋塞米浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样品，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取两次，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为呋塞米的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为10～2000ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中呋塞米的浓度。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 徐州佳生医药科技有限公司 |
| 发明人： | 林明弘 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请号： | CN201811450997.5 |
| 公开号： | CN109541106A |
| 代理机构： | 徐州市淮海专利事务所 32205 |
| 代理人： | 李妮 |
| 分类号： | G01N30/88(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N30 |
| 申请人地址： | 221000 江苏省徐州市泉山区软件园路6号徐州软件园1号楼C座701室 |
| 主权项： | 1.一种液质联用测定血浆中呋塞米浓度的方法，其特征在于：血浆样品经预处理后经高效液相色谱‑串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤：(1)血浆样品预处理：血浆以K2EDTA为抗凝剂，以呋塞米‑d5为内标；于96深孔板中精密加入100uL的血浆样品，加入5uL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入5uL的1ng/uL的内标呋塞米‑d5溶液，混匀后加入500uL的乙腈于96深孔板中，涡旋混合1min，于20℃以3000rpm离心10min，取上层清液80uL至装有420uL混合有机溶剂的96深孔板中，混合有机溶剂为水：乙腈：甲酸按照体积比95：5：0.2混合得到的混合物，涡旋混匀，于20℃以3000rpm离心5min后作为测试样品待检测；(2)试样测定：取10uL测试样品注入高效液相色谱‑串联质谱仪中，检测样品中呋塞米和内标呋塞米‑d5的色谱峰，并据此计算所述血浆样品中的呋塞米浓度；(3)液相色谱测定，条件为：色谱柱：Agilent ZORBAX XDB‑C18，5um，柱规格为50×2.1mm；色谱柱温：40℃；流动相A：水/甲酸/1M醋酸铵的体积百分比为100/0.2/0.1；流动相B：乙腈/水/甲酸/1M醋酸铵的体积百分比为80/20/0.2/0.1；洗液：乙腈/水的体积百分比为50/50；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10uL，分析时间4min；(4)质谱测定，条件为：离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为‑4500V，雾化温度为480℃，喷雾气压力为20Psi，辅助加热气压力为20Psi，气帘气压力为20Psi，碰撞气压力为8Psi，去簇电压分别为‑25eV的呋塞米和呋塞米‑d5；碰撞室入口电压分别为‑10eV的呋塞米和呋塞米‑d5；碰撞电压分别为‑20eV的呋塞米和呋塞米‑d5；碰撞室出口电压分别为‑10eV的呋塞米和呋塞米‑d5；负离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应分别为：m/z329.0→m/z285.0，其为呋塞米；和m/z334.0→m/z290.0，其为呋塞米‑d5。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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