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原文传递一种液质联用测定血浆中氨溴索浓度的方法

专利名称：	一种液质联用测定血浆中氨溴索浓度的方法
摘要：	本发明公开了一种液质联用测定血浆中氨溴索浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样本，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为氨溴索的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为0.4～120ng/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中氨溴索的浓度。
专利类型：	发明专利
申请人：	南京立顺康达医药科技有限公司
发明人：	林明弘
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T21:00:00+0805
申请号：	CN201911409585.1
公开号：	CN111044658A
代理机构：	北京淮海知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	李妮
分类号：	G01N30/88;G01N30/06;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/88;G01N30/06
申请人地址：	211300 江苏省南京市高淳区经济开发区双高路86号标准厂房区三期2号厂房第四层
主权项：	1.一种液质联用测定血浆中氨溴索浓度的方法，其特征在于：血浆样本经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤： (1)血浆样本预处理：血浆以K2EDTA为抗凝剂，以氨溴索-d5为内标；于96深孔板中精密加入100μL的血浆样本，加入5μL的体积比为1：1的甲醇水溶液，混匀后加入5μL的0.2ng/μL的内标氨溴索-d5溶液，混匀后加入500μL的乙腈，涡旋混合1min，于6℃以3000rpm离心10min，取上层清液150μL至装有350μL混合有机溶剂的另一96深孔板中，涡旋混匀，于6℃以3000rpm离心5min后作为测试样本待检测；所述混合有机溶剂为水：乙腈：甲酸按照体积比98：2：0.2混合得到的混合物；以上过程中除了涡旋和离心，其他过程均需于冰浴条件下操作； (2)试样测定：取10μL测试样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中氨溴索和内标氨溴索-d5的色谱峰，并据此计算所述血浆样本中的氨溴索浓度；液相色谱测定条件为：色谱柱为SynergiTM 4um Polar-RP柱规格为50×2mm；色谱柱温为40℃；流动相A为水：甲酸按照体积百分比100：0.2混合得到的混合物；流动相B为乙腈：甲酸按照体积百分比100：0.2混合得到的混合物；洗液为乙腈：水按照体积百分比50：50混合得到的混合物；自动进样器温度为15℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10μL，分析时间3.0min；质谱测定条件为：离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为5000V，雾化温度为500℃，喷雾气压力为30Psi，辅助加热气压力为30Psi，气帘气压力为30Psi，碰撞气压力为8Psi，氨溴索和氨溴索-d5的去簇电压均为30eV；氨溴索和氨溴索-d5的碰撞室入口电压均为10eV；氨溴索和氨溴索-d5的碰撞电压均为30eV；氨溴索和氨溴索-d5的碰撞室出口电压均为15eV；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应分别为：m/z378.9→m/z263.8，其为氨溴索；和m/z384.0→m/z263.9，其为氨溴索-d5。 2.根据权利要求1所述的一种液质联用测定血浆中氨溴索浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中梯度洗脱的程序为： 3.根据权利要求1或2所述的一种液质联用测定血浆中氨溴索浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，采用内标法，以氨溴索和内标氨溴索-d5的峰面积比值带入标准曲线方程计算所述血浆样本中的氨溴索的浓度。 4.根据权利要求3所述的一种液质联用测定血浆中氨溴索浓度的方法，其特征在于：所述标准曲线方程的建立包括以下步骤：取十份100μL的空白血浆置于96深孔板中，并依次命名为最低定量下限样品、标样1、标样2、标样3、标样4、标样5、标样6、最高定量上限样品、零浓度样品和空白样品共计十份样品，所述零浓度样品中含有内标氨溴索-d5溶液，不含氨溴索溶液，用于排除内标氨溴索-d5溶液对检测结果造成的干扰；所述空白样品中不含氨溴索溶液和内标氨溴索-d5溶液，用于排除所使用的空白血浆对检测结果造成的干扰；以贮备液的形式添加5μL浓度分别为0.008ng/μL、0.02ng/μL、0.1ng/μL、0.2ng/μL、0.6ng/μL、1ng/μL、1.6ng/μL、2.4ng/μL的氨溴索溶液至最低定量下限样本、标样1～6、最高定量上限样本中，分别向零浓度样本和空白样本中加入5μL的体积比为1：1的甲醇水溶液，将上述十份样品分别混匀，再分别向除空白样品外的九份样品中加入5μL的0.2ng/μL的内标氨溴索-d5溶液，向空白样本中加入5μL的体积比为1：1的甲醇水溶液，再将上述十份样品分别混匀，再向十份样本中分别加入500μL的乙腈，涡旋混合1min，于6℃以3000rpm离心10min，取上层清液150μL转移至装有350μL混合有机溶剂的另一96深孔板中，涡旋混匀，于6℃以3000rpm离心5min后作为十份标准样本待检测；所述混合有机溶剂为水：乙腈：甲酸按照体积比98：2：0.2混合得到的混合物；以上过程中除了涡旋和离心，其他过程均需于冰浴条件下操作；分别取10μL标准样本注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样本中的氨溴索和内标氨溴索-d5的色谱峰，并据此得到标准曲线，以用于计算所述血浆中的氨溴索的浓度。 5.根据权利要求1或2所述的一种液质联用测定血浆中氨溴索浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的液相色谱测定条件还包括：自动进样器洗针体积为500μL；自动进样器进样针深度为45mm；自动进样器清洗速度为35μL/s；自动进样器进样速度为5μL/s；自动进样器清洗时间为5.0min；自动进样器进样针清洗时浸泡时间为5s；自动进样器清洗模式为进样前及进样后。
所属类别：	发明专利