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原文传递一种液质联用测定血浆中头孢羟氨苄浓度的方法

专利名称：	一种液质联用测定血浆中头孢羟氨苄浓度的方法
摘要：	本发明公开了一种液质联用测定血浆中头孢羟氨苄浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样品，加入一定量的混合有机溶剂进行萃取两次，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测。本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，为头孢羟氨苄的血药浓度测定提供依据；本方法的血浆标准曲线线性范围为0.1～60ug/mL，批内和批间精密度RSD均小于±15％，适合于测定血浆中头孢羟氨苄的浓度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	徐州立兴佳正医药科技有限公司
发明人：	黄靖智
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910039868.5
公开号：	CN109682913A
代理机构：	徐州市淮海专利事务所
代理人：	李妮
分类号：	G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	221000 江苏省徐州市泉山区软件园路6号徐州软件园1号楼C座七层
主权项：	1.一种液质联用测定血浆中头孢羟氨苄浓度的方法，其特征在于：血浆样品经预处理后经高效液相色谱-串联质谱检测其浓度，具体方法包括以下步骤： (1)血浆样品预处理：以K2EDTA为抗凝剂，以头孢羟氨苄-d4为内标；于96深孔板中精密加入100uL的血浆样品，加入5uL的体积分数为50％的甲醇水溶液，混匀后加入5uL的0.02ug/uL的内标头孢羟氨苄-d4溶液，混匀后加入500uL乙腈于96深孔板中，涡旋混合1min，于6℃以3000rpm离心10min，取上层清液50uL至装有1000uL混合有机溶剂的96深孔板中，混合有机溶剂为甲醇：水：甲酸按照体积比85：15：0.1混合得到的混合物，涡旋混匀，于6℃以3000rpm离心5min后作为测试样品待检测；以上过程中除了涡旋和离心，其他过程均需于冰浴条件下操作； (2)试样测定：取10uL测试样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样品中头孢羟氨苄和内标头孢羟氨苄-d4的色谱峰，并据此计算所述血浆样品中的头孢羟氨苄浓度； (3)液相色谱条件：色谱柱：RestekAllure PFPP，5um，柱规格为50×2.1mm；色谱柱温：40℃；流动相A：水/甲酸的体积百分比为100/0.1；流动相B：甲醇/甲酸的体积百分比为100/0.1；洗液：乙腈/水的体积百分比为50/50；自动进样器温度为6℃；梯度洗脱，流速为0.4mL/min，进样量为10uL，分析时间3.5min； (4)质谱条件：离子源为电喷雾离子源，喷雾电压为5500V，雾化温度为450℃，喷雾气压力为20Psi，辅助加热气压力为20Psi，气帘气压力为20Psi，碰撞气压力为8Psi，去簇电压分别为25eV的头孢羟氨苄和头孢羟氨苄-d4；碰撞室入口电压分别为10eV的头孢羟氨苄和头孢羟氨苄-d4；碰撞电压分别为20eV的头孢羟氨苄和头孢羟氨苄-d4；碰撞室出口电压分别为10eV的头孢羟氨苄和头孢羟氨苄-d4；正离子方式检测；扫描方式为多重反应监测；用于定量分析的离子反应分别为：m/z364.1→m/z208.1，其为头孢羟氨苄；和m/z368.2→m/z212.1，其为头孢羟氨苄-d4。 2.根据权利要求1所述的一种液质联用测定血浆中头孢羟氨苄浓度的方法，其特征在于：所述步骤(3)中梯度洗脱的程序为： 3.根据权利要求1或2所述的一种液质联用测定血浆中头孢羟氨苄浓度的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，采用内标法，以头孢羟氨苄和内标头孢羟氨苄-d4的峰面积比值带入标准曲线方程计算所述血浆样品中的头孢羟氨苄的浓度。 4.根据权利要求3所述的一种液质联用测定血浆中头孢羟氨苄浓度的方法，其特征在于：所述标准曲线方程的建立包括以下步骤：取100uL空白血浆10份置于96深孔板中，以贮备液的形式分别添加5uL浓度分别为0.002ug/μL、0.004ug/μL、0.01ug/μL、0.02ug/μL、0.1ug/μL、0.2ug/μL、0.8ug/μL、1.2ug/μL的吡嗪酰胺溶液至最低定量下限样本、标样1、标样2、标样3、标样4、标样5、标样6、最高定量上限样本中，分别添加5uL体积分数为50％的甲醇水溶液至空白样本和零浓度样本，混匀后分别向最低定量下限样本、标样1、标样2、标样3、标样4、标样5、标样6、最高定量上限样本、零浓度样本中加入5uL的0.02ug/uL的内标头孢羟氨苄-d4溶液，向空白样本中加入5uL的体积分数为50％的甲醇水溶液，混匀后分别向10份样本中加入500uL乙腈于96深孔板中，涡旋混合1min，于6℃以3000rpm离心10min，取上层清液50uL至装有1000uL混合有机溶剂的96深孔板中，混合有机溶剂为甲醇：水：甲酸按照体积比85：15：0.1混合得到的混合物，涡旋混匀，于6℃以3000rpm离心5min后分别作为10份标准样品待检测；以上过程中除了涡旋和离心，其他过程均需于冰浴条件下操作；分别取10uL标准样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样品中的头孢羟氨苄和内标头孢羟氨苄-d4的色谱峰，并据此得到标准曲线，以用于计算所述血浆中的头孢羟氨苄的浓度。
所属类别：	发明专利