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原文传递高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法

专利名称：	高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法
摘要：	本发明公开了一种高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法，包括：采用甲醇溶解奥氮平配制多个浓度的标准曲线工作液，采用甲醇溶解稳定同位素内标物配制成内标物工作液；将0‑5μL多个浓度的标准曲线工作液分别加入空白血浆补足至100μL，涡旋制成多个浓度的标准曲线血浆样品，加入内标物工作液，离心，取上清液，进行LC‑MS/MS定量分析，绘制标准曲线；精密吸取100μL的待测血浆，加入内标物工作液，离心，取上清液，进行LC‑MS/MS定量分析，在所述标准曲线上读取奥氮平浓度。本发明具有样本前处理简单方便、分析时间短、所需样本体积少、灵敏度高、回收率高、基质效应小等特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	首都医科大学附属北京朝阳医院
发明人：	杜萍;刘丽宏;李鹏飞
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201910186286.X
公开号：	CN110068644A
代理机构：	北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	史霞
分类号：	G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	100020 北京市朝阳区工体南路8号
主权项：	1.高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法，其特征在于，包括：采用甲醇溶解奥氮平配制多个浓度的标准曲线工作液，采用甲醇溶解稳定同位素内标物配制成内标物工作液；将0-5μL多个浓度的标准曲线工作液分别加入空白血浆补足至100μL，涡旋制成多个浓度的标准曲线血浆样品，加入300-400μL内标物工作液，0-4℃下离心，取上清液，进行LC-MS/MS定量分析，以血浆样品中奥氮平浓度为横坐标，以奥氮平峰面积与稳定同位素内标物峰面积的比值为纵坐标，绘制线性范围为0.1-20ng/mL的标准曲线；精密吸取100μL的待测血浆，加入绘制标准曲线时等量的内标物工作液，0-4℃下离心，取上清液，进行LC-MS/MS定量分析，在所述标准曲线上读取测得的奥氮平峰面积与内标物峰面积的比值对应的奥氮平浓度；液相条件为：色谱柱为X Brige C18，内径2.1mm、柱长50mm、粒径3.5mm，流速0.5mL/min，进样体积5μL，柱温35℃，洗针方法为依次采用500-1000μL的体积分数为70％的异丙醇水溶液洗针、500-1000μL的体积分数为20％的甲醇水溶液洗针，流动相的有机相为甲醇，水相为含10mM甲酸铵和体积分数为0.005％的七氟丁酸的水溶液，梯度洗脱设置为0-30s、31-120s、121-180s、181-190s、191-300s有机相与水相的体积比分别为3:7、3:7、8:2、95:5、3:7；质谱条件为：采用电喷雾离子源的多反应监测模式，正离子扫描模式，奥氮平的定性离子对为313.2→282.1、奥氮平的定量离子对为313.2→2561、内标的离子对为316.2→256.1，扫描时间为100ms，质谱的喷雾电压3400V；温度600℃；雾化气压力为55psi；辅助气为55psi；气帘气为25psi；EP电压为10eV；DP电压为35V；碰撞气压力为6psi。 2.如权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法，其特征在于，采用甲醇溶解奥氮平配制成浓度为2、4、10、20、40、100、200、400ng/mL的标准曲线工作液，采用甲醇溶解稳定同位素内标物配制成浓度为1.0mg/mL的内标物工作液。 3.如权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法，其特征在于，精密吸取5μL标准曲线工作液，加入95μL空白血浆，加入400μL内标物工作液。 4.如权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法，其特征在于，稳定同位素内标物为氘代物。 5.如权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法，其特征在于，4℃下13000rpm离心10min。 6.如权利要求1-5任一项所述的高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法，其特征在于，采用甲醇溶解奥氮平配制多个浓度的质控工作液，采用甲醇溶解稳定同位素内标物配制成内标物工作液；将0-5μL多个浓度的质控工作液分别加入空白血浆补足至100μL，涡旋制成多个浓度的质控血浆样品，加入400μL内标物工作液，0-4℃下离心，取上清液，进行LC-MS/MS定量分析，校正所述标准曲线，使至少2/3的质控样品的准确度在标示值的±15％内，且每一浓度水平至少50％样品应符合这一标准。 7.如权利要求6所述的高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法，其特征在于，采用甲醇溶解奥氮平配制成浓度为5、80、320ng/mL的质控工作液。 8.如权利要求7所述的高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法，其特征在于，精密吸取5μL质控工作液，加入95μL空白血浆，加入400μL内标物工作液。 9.如权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法，其特征在于，有机相的制备具体为：将色谱纯甲醇，采用1L的容量瓶定容，采用0.22μm有机滤膜经G6垂熔玻璃漏斗过滤后，置于流动相瓶中，超声脱气，张贴标签后备用；水相的制备具体为：用量筒量取适量的纯水置于烧杯中，加入1M甲酸铵溶液10mL、七氟丁酸50μL，混匀后置于容量瓶中定容至1L，配制成含10mM甲酸铵和0.005％七氟丁酸的水相，经0.22μm水相水滤膜经G6垂熔玻璃漏斗过滤后转移至流动相瓶中，超声脱气，张贴标签后备用。 10.如权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱测定血浆中奥氮平浓度的方法，其特征在于，洗针方法为：用量筒量取800mL纯水置于烧杯中，加入200mL色谱纯甲醇，配制成体积分数为20％的甲醇水溶液，经0.22μm水滤膜经G6垂熔玻璃漏斗过滤后转移至流动相瓶中，超声脱气，张贴标签后备用；量取300mL纯水置于烧杯中，加入700mL色谱纯异丙醇，配制成体积分数为70％的异丙醇水溶液，经0.22μm水滤膜经G6垂熔玻璃漏斗过滤后转移至流动相瓶中，超声脱气，张贴标签后备用；依次采用700μL的体积分数为70％的异丙醇水溶液洗针3次、700μL的体积分数为70％的甲醇水溶液洗针2次。
所属类别：	发明专利