详情

原文传递水产品中甲基睾酮的液相色谱-串联质谱测定方法

专利名称：	水产品中甲基睾酮的液相色谱-串联质谱测定方法
摘要：	本发明提供了一种水产品中甲基睾酮的液相色谱‑串联质谱测定方法，包括如下步骤：水产品预处理后，取可食部分，均质，加乙酸乙酯，涡旋混合，超声，离心，取上清液，氮气吹干，加乙腈水溶液复溶，过固相萃取柱净化，微孔滤膜过滤后，至液相色谱‑串联质谱仪检测。本发明仅需要用乙酸乙酯提取1次，且净化步骤仅用通过型方式过柱，较现有方法节约了提取和净化时间，同时大大减少了有机试剂的使用，属于高效环保型方法。因此本发明通过简单的样品前处理方法和仪器分析方法，不仅使检测样品范围增加到鱼类、虾类、蟹类、贝类、牛蛙和甲鱼等多种水产品基质，且方法简便快捷，试剂用量少、灵敏度高、成本低、准确度高、稳定性好。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	中国水产科学研究院东海水产研究所
发明人：	张璇;黄冬梅
专利状态：	有效
申请日期：	2022-10-17T00:00:00+0800
发布日期：	2023-01-10T00:00:00+0800
申请号：	CN202211267340.1
公开号：	CN115586275A
代理机构：	上海伯瑞杰知识产权代理有限公司
代理人：	曹莉
分类号：	G01N30/02;G01N30/72;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/72
申请人地址：	200090 上海市杨浦区军工路300号
主权项：	1.一种水产品中甲基睾酮的液相色谱-串联质谱测定方法，其特征在于：其包括如下步骤： (1)、将水产品去头、骨、内脏，取可食部分分别绞碎混合均匀，得到预处理的水产品，并在-18℃以下保存； (2)、将预处理的水产品置于离心管中，加入内标物标准工作液进行涡旋混合，接着加入乙酸乙酯，涡旋，超声，离心，取上清液转移至离心管中，并在氮气下吹干；最后加入乙腈水溶液振荡，得到待净化液； (3)、将中性氧化铝固相萃取柱用乙腈活化后，移入待净化液，将流出液过聚四氟乙烯滤膜后，至液相色谱-串联质谱仪进行测定。 2.根据权利要求1所述的水产品中甲基睾酮的液相色谱-串联质谱测定方法，其特征在于：步骤(1)中，所述水产品包括鱼类、虾类、蟹类、贝类、牛蛙和甲鱼。 3.根据权利要求1所述的水产品中甲基睾酮的液相色谱-串联质谱测定方法，其特征在于：步骤(2)中，所述内标物标准工作液的制备过程为：将甲基睾酮-D3标准中间液置于100mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀，-18℃避光保存。 4.根据权利要求3所述的水产品中甲基睾酮的液相色谱-串联质谱测定方法，其特征在于：所述甲基睾酮-D3标准中间液的制备过程为：将甲基睾酮-D3标准储备液置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀，-18℃避光保存。 5.根据权利要求4所述的水产品中甲基睾酮的液相色谱-串联质谱测定方法，其特征在于：所述甲基睾酮-D3标准储备液的制备过程为：将甲基睾酮-D3溶于甲醇后至10mL容量瓶，用甲醇定容至刻度，混匀，于-18℃避光保存。 6.根据权利要求1所述的水产品中甲基睾酮的液相色谱-串联质谱测定方法，其特征在于：步骤(2)中，所述超声的时间为10-20min；所述离心的转速为4000-8000r/min，离心的时间为2-5min。 7.根据权利要求1所述的水产品中甲基睾酮的液相色谱-串联质谱测定方法，其特征在于：步骤(3)中，所述液相色谱-串联质谱仪测定标准溶液中甲基睾酮的过程为： 3-1)甲基睾酮标准储备液及其内标物标准储备液的制备：甲基-17Β-羟基-雄甾-4-烯-3-酮和甲基睾酮-D3分别在甲醇中溶解后至10mL容量瓶，分别用甲醇定容至刻度，混匀，分别得到甲基睾酮标准储备液和内标物标准储备液，于-18℃避光保存； 3-2)甲基睾酮标准中间液的制备：将甲基睾酮标准储备液置于50mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀，-18℃避光保存；内标物标准中间液的制备：将内标物标准储备液置于50mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀，-18℃避光保存； 3-3)甲基睾酮标准工作液的制备：将甲基睾酮标准中间液置于100mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀，-18℃避光保存；内标物标准工作液的制备：将内标物标准中间液置于100mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀，-18℃避光保存； 3-4)将0.1mL、0.25mL、0.5mL、1.0mL、2.5mL、5.0mL的甲基睾酮标准工作液分别置于10mL的容量瓶中，并分别加入内标物标准工作液，用乙腈水溶液稀释并定容，得到浓度梯度为2μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L的标准系列溶液； 3-5)液相色谱条件：CapcellPAK C18 MGII色谱柱，100mm×2.0mm，滤孔孔径为5μm，柱温：35℃，流速：0.4mL/min，进样量：10μL，流动相A为0.1％甲酸的水溶液，流动相B为乙腈； 3-6)质谱条件：采用正离子扫描，喷雾电压：5500V，离子传输毛细管温度：550℃，35psi的气帘气压力CUR，55psi的雾化气压力GS1，55psi的辅助加热气压力GS2，5psi的碰撞气CAD； 3-7)将步骤3-4)得到的标准系列溶液采用步骤5)的液相色谱条件和步骤6)的质谱条件制作标准曲线，并进行水产品中甲基睾酮的定性测定和定量测定。 8.根据权利要求7所述的水产品中甲基睾酮的液相色谱-串联质谱测定方法，其特征在于：步骤3-7)中，所述定性测定的方法检测限为0.4μg/kg，所述定量测定的定量限为1μg/kg。