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原文传递一种基于重氮化反应和SERS快速检测水产品中总嘌呤含量的方法

专利名称：	一种基于重氮化反应和SERS快速检测水产品中总嘌呤含量的方法
摘要：	本发明公开了一种基于重氮化反应和SERS快速检测水产品中总嘌呤含量的方法，特点是包括以下步骤：（1）在水产样品中加入高氯酸溶液，并在碱性条件下加热水解提取嘌呤；（2）在待测样品液中加入NaNO2和HCl，加热发生水解生成酚；然后加入黄嘌呤氧化酶生成最终产物尿酸；（3）合成Au@AgNPs；（4）将含有尿酸的待测样品与步Au@AgNPs溶液按体积比1：1的比例混匀，测其SERS信号强度，根据尿酸拉曼峰强度与尿酸浓度之间的定量关系，计算获得待测样品中尿酸的浓度，根据重氮化反应公式，计算得出水产品中总嘌呤含量，优点是检测速度快、灵敏度高以及特异性强。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	宁波大学
发明人：	张进杰;郭小莹;徐大伦;黄涛;杨文鸽;王欣宇;钱佳敏
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-02T00:00:00+0800
申请号：	CN201910336482.0
公开号：	CN110082336A
代理机构：	宁波奥圣专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	何仲
分类号：	G01N21/65(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	315211 浙江省宁波市江北区风华路818号
主权项：	1.一种基于重氮化反应和SERS快速检测水产品中总嘌呤含量的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）嘌呤提取称取0.15-0.25 g水产样品于离心管中，加入3.0 mL 浓度为10wt%的高氯酸溶液，涡旋搅拌35-45 s，加热水解50-70 min；将水解后的样品用氢氧化钠调整pH至碱性，加水定容至10.0mL，离心取上清液，经滤纸过滤得到待测样品液；（2）体外重氮化反应：在步骤（1）得到的待测样品液中加入NaNO2至其终浓度为2.5-3.5 mol/L，加入HCl至其终浓度为0.14-0.18 mol/L，置于40-80℃的水浴锅中，反应20-50 min后，加入黄嘌呤氧化酶，于pH=7.0-7.5，反应温度20-50℃下，反应20-60 min，得到含有尿酸的待测样品，其中黄嘌呤氧化酶添加量为40-100 U/L；（3）Au@AgNPs的合成将0.2-0.3mL的浓度为0.1M 氯金酸加入到100 mL超纯水中，在磁力搅拌和油浴条件下加热至沸腾，再快速注入1.0 mL的浓度为1wt%的柠檬酸钠溶液后，回流处理20-40min，直至溶液颜色变为酒红色；在搅拌下逐渐冷却至室温后，将所得的溶液通过0.22μm超滤膜过滤，取滤过液，得到含有粒径为40-50nm的AuNPs颗粒的AuNPs悬浮液；取10mL AuNPs悬浮液，在磁力搅拌下加入1.5mL浓度为0.1M的抗坏血酸溶液，继续在磁力搅拌下以12-18μL/min的速度加入1.5-4.5mL浓度为1mM的硝酸银溶液直至溶液的颜色变成橙红色，经浓缩后得到Au@AgNPs溶液；（4）SERS样品制备将步骤（2）制备的含有尿酸的待测样品与步骤（3）制备得到的Au@AgNPs溶液按体积比1：1的比例混匀，取3uL混合溶液滴于石英片上，测其SERS信号强度，根据尿酸拉曼峰强度与尿酸浓度之间的定量关系，计算获得待测样品中尿酸的浓度，根据重氮化反应公式，计算得出水产品中总嘌呤含量。 2.根据权利要求1所述的一种基于重氮化反应和SERS快速检测水产品中总嘌呤含量的方法，其特征在于：步骤（2）中HCl 浓度为0.16 mol/L、NaNO2质量浓度为3.0 g/L，并在60℃下水浴40 min；酶用量100 U/L、酶解温度和时间为30℃恒温40 min、酶解pH为7.0。 3.根据权利要求1所述的一种基于重氮化反应和SERS快速检测水产品中总嘌呤含量的方法，其特征在于步骤（3）中浓缩过程具体为：取一定体积Au@AgNPs悬浮原溶液，8000r/min离心5min，移除原溶液3/4体积的上清液后，在振荡器上振荡2min，使Au@AgNPs悬浮均匀，即得到浓缩4倍体积的Au@AgNPs溶液。
所属类别：	发明专利