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原文传递一种过氧化氢浓度的检测方法及其应用

专利名称：	一种过氧化氢浓度的检测方法及其应用
摘要：	本发明提供了一种过氧化氢浓度的检测方法及其应用，所述检测方法是用金属有机骨架纳米材料通过分光光度法检测过氧化氢的浓度，选用金属有机骨架纳米材料通过分光光度法检测过氧化氢的浓度，其中本发明用的金属有机骨架纳米材料对过氧化氢具有较高的亲和力，无需加入过氧化物酶色源底物，利用反应前后金属有机骨架纳米材料自身吸光光度值的变化即可完成对过氧化氢的检测，且能完成复杂体系中葡萄糖或黄嘌呤的检测，在食品、环境分析或生物医学检测领域具有很大的实用价值；检测方法具有分析周期短、操作过程简单、数据准确、灵敏度高、检出限低等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	国家纳米科学中心
发明人：	杨蓉;乞萃;刘学良;丁建炜
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-08T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910378915.9
公开号：	CN110095420A
代理机构：	北京品源专利代理有限公司
代理人：	巩克栋
分类号：	G01N21/31(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	100190 北京市海淀区中关村北一条11号
主权项：	1.一种过氧化氢浓度的检测方法，其特征在于，所述检测方法是用金属有机骨架纳米材料通过分光光度法检测过氧化氢的浓度。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述金属有机骨架纳米材料的化学式为Xm[Fe(CN)6]n·yH2O，其中X为锰离子、铜离子或钴离子中的任意一种，m:n:y＝(1-6):(1-4):(1-25)；优选地，所述金属有机骨架纳米材料的化学式为Mn4[Fe(CN)6]2.667·15.84H2O。 3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述金属有机骨架纳米材料的制备方法包括如下步骤： (1)将金属盐和分散剂在混合溶液中混合，得到混合液，其中金属盐为锰盐、铜盐或钴盐中的任意一种； (2)将步骤(1)得到的混合液和铁氰酸钾溶液混合，反应，得到所述金属有机骨架纳米材料。 4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述分散剂包括聚乙烯吡咯烷酮和/或二水合柠檬酸三钠；优选地，步骤(1)所述混合溶液为水和醇类溶剂的混合；优选地，所述水和醇类溶剂的体积比为(5-15):1，优选9:1；优选地，所述醇类溶剂为乙醇；优选地，步骤(1)所述锰盐包括一水合硫酸锰、硝酸锰或四水合氯化锰中的任意一种或至少两种的组合；优选地，步骤(1)所述铜盐包括硝酸铜、氯化铜、一水合乙酸铜、五水硫酸铜或乙酰丙酮铜中的任意一种或至少两种的组合；优选地，步骤(1)所述钴盐包括四水合乙酸钴、六水合硝酸钴、六水合氯化钴或乙酰丙酮钴中的任意一种或至少两种的组合；优选地，步骤(1)所述混合液中金属盐的浓度为10-20mM。 5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述铁氰酸钾溶液中铁氰酸钾的浓度为15-30mM，优选20mM；优选地，步骤(2)所述混合是在搅拌条件下进行混合的；优选地，步骤(2)所述反应的温度为15-45℃；优选地，步骤(2)所述反应的时间为1-2h；优选地，所述步骤(2)还包括将反应得到的反应物进行后处理；优选地，所述后处理包括离心、清洗以及干燥；优选地，所述清洗用溶剂为乙醇。 6.根据权利要求1-5任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤： S1、将浓度梯度的过氧化氢标准溶液和金属有机骨架纳米材料溶液混合，反应，得到反应液，而后通过分光光度法测试反应液的吸光度，根据浓度和吸光度的关系，绘制标准曲线； S2、将待测样品和金属有机骨架纳米材料溶液混合，反应，得到反应液，而后通过分光光度法测试反应液的吸光度，根据步骤S1得到的标准曲线定量待测样品中的过氧化氢浓度。 7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤S1所述浓度梯度的过氧化氢标准溶液是通过磷酸缓冲盐溶液稀释过氧化氢得到的；优选地，所述磷酸缓冲盐溶液的浓度为0.01-0.1M；优选地，以步骤S1所述浓度梯度的过氧化氢标准溶液的体积为100μL计，所述金属有机骨架纳米材料溶液的体积为10-100μL；优选地，以步骤S2所述待测样品的体积为100μL计，所述金属有机骨架纳米材料溶液的体积为10-100μL；优选地，所述金属有机骨架纳米材料溶液的浓度为2-8mg/mL，优选5mg/mL；优选地，所述金属有机骨架纳米材料溶液的溶剂为水和/或乙醇；优选地，所述反应的时间为5-20min；优选地，所述反应之前还包括将混合得到的混合物稀释5-10倍；优选地，所述稀释是通过磷酸缓冲盐溶液稀释的；优选地，所述吸光度为波长在420nm的吸光度。 8.根据权利要求1-7任一项所述的检测方法在葡萄糖或黄嘌呤检测中的应用；优选地，所述应用还包括用氧化酶处理葡萄糖或黄嘌呤；优选地，所述处理葡萄糖用氧化酶为葡萄糖氧化酶；优选地，所述处理黄嘌呤用氧化酶为黄嘌呤氧化酶。 9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述检测方法在葡萄糖检测中的应用包括如下步骤： A1、将预处理后的浓度梯度的葡萄糖标准溶液和金属有机骨架纳米材料溶液混合，反应，得到反应液，而后通过分光光度法测试反应液的吸光度，根据浓度和吸光度的关系，绘制标准曲线； A2、将预处理后的待测葡萄糖样品和金属有机骨架纳米材料溶液混合，反应，得到反应液，而后通过分光光度法测试反应液的吸光度，根据步骤S1得到的标准曲线定量待测葡萄糖样品中的葡萄糖浓度；优选地，步骤A1中所述浓度梯度的葡萄糖标准溶液的预处理包括：将葡萄糖氧化酶的磷酸缓冲盐溶液加入到浓度梯度的葡萄糖标准溶液中，孵育，得到预处理后的浓度梯度的葡萄糖标准溶液；优选地，步骤A2中所述待测葡萄糖样品的预处理包括：将葡萄糖氧化酶的磷酸缓冲盐溶液加入到待测葡萄糖样品中，孵育，得到预处理后的待测葡萄糖样品；优选地，所述磷酸缓冲盐溶液的浓度为0.01-0.1M；优选地，所述葡萄糖氧化酶的磷酸缓冲盐溶液中葡萄糖氧化酶的浓度为1-5mg/mL；优选地，以所述葡萄糖标准溶液或待测葡萄糖样品的体积为100μL计，所述葡萄糖氧化酶的磷酸缓冲盐溶液的体积为10-40μL，优选30μL；优选地，所述孵育的温度为37-50℃，优选50℃；优选地，所述孵育的时间为60-90min，优选90min；优选地，以所述葡萄糖标准溶液或待测葡萄糖样品的体积为100μL计，所述金属有机骨架纳米材料溶液的体积为10-100μL；优选地，所述金属有机骨架纳米材料溶液的浓度为2-8mg/mL；优选地，所述金属有机骨架纳米材料溶液的溶剂为水和/或乙醇；优选地，所述反应的时间为5-20min；优选地，所述反应之前还包括将混合得到的混合物稀释5-10倍；优选地，所述稀释是通过磷酸缓冲盐溶液稀释的；优选地，所述吸光度为波长在420nm的吸光度。 10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述检测方法在黄嘌呤检测中的应用包括如下步骤： B1、将预处理后的浓度梯度的黄嘌呤标准溶液和金属有机骨架纳米材料溶液混合，反应，得到反应液，而后通过分光光度法测试反应液的吸光度，根据浓度和吸光度的关系，绘制标准曲线； B2、将预处理后的待测黄嘌呤样品和金属有机骨架纳米材料溶液混合，反应，得到反应液，而后通过分光光度法测试反应液的吸光度，根据步骤S1得到的标准曲线定量待测黄嘌呤样品中的黄嘌呤浓度；优选地，步骤B1中所述浓度梯度的黄嘌呤标准溶液的预处理包括：将黄嘌呤氧化酶的磷酸缓冲盐溶液加入到浓度梯度的黄嘌呤标准溶液中，孵育，得到预处理后的浓度梯度的黄嘌呤标准溶液；优选地，步骤B2中所述待测黄嘌呤样品的预处理包括：将黄嘌呤氧化酶的磷酸缓冲盐溶液加入到待测黄嘌呤样品中，孵育，得到预处理后的待测黄嘌呤样品；优选地，所述磷酸缓冲盐溶液的浓度为0.01-0.1M；优选地，所述黄嘌呤氧化酶的磷酸缓冲盐溶液中黄嘌呤氧化酶的浓度为0.02-0.08mg/mL；优选地，以所述黄嘌呤标准溶液或待测黄嘌呤样品的体积为100μL计，所述黄嘌呤氧化酶的磷酸缓冲盐溶液的体积为10-40μL，优选25μL；优选地，所述孵育的温度为37℃；优选地，所述孵育的时间为60-90min，优选75min；优选地，以所述黄嘌呤标准溶液或待测黄嘌呤样品的体积为100μL计，所述金属有机骨架纳米材料溶液的体积为10-100μL；优选地，所述金属有机骨架纳米材料溶液的浓度为2-8mg/mL；优选地，所述金属有机骨架纳米材料溶液的溶剂为水和/或乙醇；优选地，所述反应的时间为5-20min；优选地，所述反应之前还包括将混合得到的混合物稀释5-10倍；优选地，所述稀释是通过磷酸缓冲盐溶液稀释的；优选地，所述吸光度为波长在420nm的吸光度。
所属类别：	发明专利