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原文传递一种高通量蛋白质分析方法及其适用文库

专利名称：	一种高通量蛋白质分析方法及其适用文库
摘要：	本发明涉及生物领域，提供了一种高通量蛋白质分析方法及其适用文库。本发明的高通量蛋白质分析方法，为采用带标签的半克隆小鼠文库，以一个或数个标签蛋白抗体对多个不同感兴趣目标蛋白进行平行指示分析，所述带标签的半克隆小鼠文库中，各半克隆小鼠为利用孤雄单倍体胚胎干细胞注入卵子后培育获得的半克隆小鼠或其有性繁殖后代，所述孤雄单倍体胚胎干细胞含有表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白的基因，所述半克隆小鼠能表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白。本发明为生物大分子的研究提供了一个适于高通量的在体、实时和动态研究的体系。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	中国科学院上海生命科学研究院
发明人：	李劲松;蒋婧;白梅竹;晏萌;康俊炎;李林;李党生
专利状态：	有效
申请日期：	2018-01-31T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201810096299.3
公开号：	CN110095610A
代理机构：	上海光华专利事务所(普通合伙)
代理人：	许亦琳
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	200031 上海市徐汇区岳阳路320号
主权项：	1.一种高通量蛋白质分析方法，为采用带标签的半克隆小鼠文库，以一个或数个标签蛋白抗体对多个不同感兴趣目标蛋白进行平行指示分析，所述带标签的半克隆小鼠文库中，各半克隆小鼠为利用孤雄单倍体胚胎干细胞注入卵子后培育获得的半克隆小鼠或其有性繁殖后代，所述孤雄单倍体胚胎干细胞含有表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白的基因，所述半克隆小鼠能表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白。 2.如权利要求1所述的高通量蛋白质分析方法，其特征在于，所述方法还包括下列特征中的一项或任选的多项： A1)所述感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白中，所述标签蛋白全部或部分曝露于融合蛋白表面； A2)所述感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白中，所述标签蛋白位于感兴趣目标蛋白的N端或C端； A3)所述标签蛋白选自：Flag,HA,Green Proteins,Red Proteins，Cyan Proteins，Yellow Proteins，Orange Proteins，Myc,His,GST,Strep,CBP,MBP,iDimerize,ProteoTuner,Shield1,SNAP-tag,CLIP-tag,ACP-tag,MCP-tag,HaloTag,Avi-tag,TAP-tag，LumioTMtag中的一种或多种； A4)所述孤雄单倍体胚胎干细胞的H19DMR及IG-DMR被敲除； A5)所述孤雄单倍体胚胎干细胞来自带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库，所述带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库中，各孤雄单倍体胚胎干细胞均含有表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白的基因； A6)所述带标签的半克隆小鼠文库中，与各感兴趣目标蛋白融合表达的标签蛋白均相同，或者，与各感兴趣目标蛋白融合表达的标签蛋白构成一标签蛋白组合； A7)先利用带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库构建带标签的半克隆小鼠文库，所述带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库中，各孤雄单倍体胚胎干细胞均含有表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白的基因。 3.如权利要求2所述的高通量蛋白质分析方法，其特征在于，所述带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库中，与各感兴趣目标蛋白融合表达的标签蛋白均相同，或者，与各感兴趣目标蛋白融合表达的标签蛋白构成一标签蛋白组合。 4.如权利要求1所述的高通量蛋白质分析方法，其特征在于，所述分析方法适于在体、实时、动态分析。 5.如权利要求1所述的高通量蛋白质分析方法，其特征在于，所述蛋白质分析方法不包括制备或使用感兴趣目标蛋白的抗体。 6.一种适用于权利要求1-5任一项所述高通量蛋白质分析方法的带标签的半克隆小鼠文库的构建方法，包括下列步骤： 1)确定感兴趣目标蛋白组合，提供与所述组合对应的带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库，所述带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库中，各孤雄单倍体胚胎干细胞均含有表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白的基因； 2)将带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库中的各孤雄单倍体胚胎干细胞分别注入卵子后培育获得半克隆小鼠，筛选出能表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白的半克隆小鼠，以筛选出的原代半克隆小鼠或其有性繁殖后代构成带标签的半克隆小鼠文库。 7.如权利要求6所述的带标签的半克隆小鼠文库的构建方法，其特征在于，所述带标签的半克隆小鼠文库还包括下列特征中的一项或任选的多项： B1)所述感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白中，所述标签蛋白全部或部分曝露于融合蛋白表面； B2)所述感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白中，所述标签蛋白位于感兴趣目标蛋白的N端或C端； B3)所述标签蛋白选自：Flag,HA,Green Proteins,Red Proteins，Cyan Proteins，Yellow Proteins，Orange Proteins，Myc,His,GST,Strep,CBP,MBP,iDimerize,ProteoTuner,Shield1,SNAP-tag,CLIP-tag,ACP-tag,MCP-tag,HaloTag,Avi-tag,TAP-tag，LumioTMtag中的一种或多种； B4)所述孤雄单倍体胚胎干细胞的H19DMR及IG-DMR被敲除； B5)所述孤雄单倍体胚胎干细胞来自带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库，所述带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库中，各孤雄单倍体胚胎干细胞均含有表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白的基因； B6)所述带标签的半克隆小鼠文库中，与各感兴趣目标蛋白融合表达的标签蛋白均相同，或者，与各感兴趣目标蛋白融合表达的标签蛋白构成一标签蛋白组合。 8.一种适用于权利要求1-5任一项所述高通量蛋白质分析方法的带标签的半克隆小鼠文库，所述带标签的半克隆小鼠文库中，各半克隆小鼠表达的感兴趣目标蛋白均与标签蛋白融合表达，各半克隆小鼠均为利用孤雄单倍体胚胎干细胞注入卵子后培育获得的半克隆小鼠或其有性繁殖后代，所述孤雄单倍体胚胎干细胞含有表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白的基因。 9.如权利要求8所述的带标签的半克隆小鼠文库，其特征在于，所述带标签的半克隆小鼠文库还包括下列特征中的一项或任选的多项： C1)所述感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白中，所述标签蛋白全部或部分曝露于融合蛋白表面； C2)所述感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白中，所述标签蛋白位于感兴趣目标蛋白的N端或C端； C3)所述标签蛋白选自：Flag,HA,Green Proteins,Red Proteins，Cyan Proteins，Yellow Proteins，Orange Proteins，Myc,His,GST,Strep,CBP,MBP,iDimerize,ProteoTuner,Shield1,SNAP-tag,CLIP-tag,ACP-tag,MCP-tag,HaloTag,Avi-tag,TAP-tag，LumioTMtag中的一种或多种； C4)所述孤雄单倍体胚胎干细胞的H19DMR及IG-DMR被敲除； C5)所述孤雄单倍体胚胎干细胞来自带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库； C6)所述带标签的半克隆小鼠文库中，与各感兴趣目标蛋白融合表达的标签蛋白均相同，或者，与各感兴趣目标蛋白融合表达的标签蛋白构成一标签蛋白组合； C7)所述带标签的半克隆小鼠文库由权利要求6或7所述的方法构建获得。 10.如权利要求8或9所述的带标签的半克隆小鼠文库或来自所述文库的半克隆小鼠的用途，为用于蛋白质分析、蛋白功能研究或药物研究领域。 11.一种适用于1-5任一项所述高通量蛋白质分析方法的带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库的构建方法，包括下列步骤： 1)确定感兴趣目标蛋白组合，对各孤雄单倍体胚胎干细胞分别进行基因改造，使其分别包含所述感兴趣目标蛋白组合中，表达各感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白的基因； 2)筛选出能表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白的孤雄单倍体胚胎干细胞； 3)将筛选出的孤雄单倍体胚胎干细胞的原代细胞或其传代单倍体细胞保种并建库获得带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库。 12.如权利要求11所述的带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库的构建方法，其特征在于，还包括下列特征中的一项或任选的多项： D1)所述感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白中，所述标签蛋白全部或部分曝露于融合蛋白表面； D2)所述感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白中，所述标签蛋白位于感兴趣目标蛋白的N端或C端； D3)所述标签蛋白选自：Flag,HA,Green Proteins,Red Proteins，Cyan Proteins，Yellow Proteins，Orange Proteins，Myc,His,GST,Strep,CBP,MBP,iDimerize,ProteoTuner,Shield1,SNAP-tag,CLIP-tag,ACP-tag,MCP-tag,HaloTag,Avi-tag,TAP-tag，LumioTMtag中的一种或多种； D4)所述孤雄单倍体胚胎干细胞的H19DMR及IG-DMR被敲除； D5)所述孤雄单倍体胚胎干细胞文库中，与各感兴趣目标蛋白融合表达的标签蛋白均相同，或者，与各感兴趣目标蛋白融合表达的标签蛋白构成一包含数个标签蛋白的组合。 13.一种适用于权利要求1-5任一项所述高通量蛋白质分析方法的带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库，所述带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库中，各孤雄单倍体胚胎干细胞均含有表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白的基因，所述孤雄单倍体胚胎干细胞注入卵子后培育获得的半克隆小鼠能表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白。 14.如权利要求13所述的带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库，其特征在于，所述带标签的半克隆小鼠文库还包括下列特征中的一项或任选的多项：所述感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白中，所述标签蛋白全部或部分曝露于融合蛋白表面； E1)所述感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白中，所述标签蛋白位于感兴趣目标蛋白的N端或C端； E2)所述标签蛋白选自：Flag,HA,Green Proteins,Red Proteins，Cyan Proteins，Yellow Proteins，Orange Proteins，Myc,His,GST,Strep,CBP,MBP,iDimerize,ProteoTuner,Shield1,SNAP-tag,CLIP-tag,ACP-tag,MCP-tag,HaloTag,Avi-tag,TAP-tag，LumioTMtag中的一种或多种； E3)所述孤雄单倍体胚胎干细胞的H19DMR及IG-DMR被敲除； E4)所述带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库中，与各感兴趣目标蛋白融合表达的标签蛋白均相同，或者，与各感兴趣目标蛋白融合表达的标签蛋白构成一标签蛋白组合； E5)所述带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库由权利要求10或11所述的方法构建获得。 15.如权利要求13或14所述的带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库或来自所述文库的孤雄单倍体胚胎干细胞的用途，为用于蛋白质分析、蛋白功能研究或药物研究领域。
所属类别：	发明专利