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原文传递基于DNA酶SERS技术测定荸荠皮中痕量汞离子的方法

专利名称：	基于DNA酶SERS技术测定荸荠皮中痕量汞离子的方法
摘要：	本发明公开了一种基于DNA酶SERS技术测定荸荠皮中痕量汞离子的方法，该方法包括如下步骤：制备已知浓度的Hg2+标准溶液体系及空白对照溶液体系，分别测定已知浓度的Hg2+标准溶液体系及空白对照溶液体系的SERS峰强度，计算ΔI，以ΔI对Hg2+的浓度关系作工作曲线，再根据上述方法测定荸荠皮中Hg2+的含量。SERS光谱检测结果表明，Hg2+浓度与ΔI的线性回归方程为△I＝0.8685x+17.92，R2＝0.9955，Hg2+浓度在2.5×10‑8～7.5×10‑7mol/L之间与ΔI线性关系良好。将其用于对荸荠皮中的Hg2+检测，测得相对标准偏差均在10％以内，回收率在101‑105％之间。本发明具有操作简单、灵敏度高的特点，可用于农产品重金属的检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	贺州学院
发明人：	黎小椿;庞永丰;罗杨合;聂辉;伍淑婕;段振华
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-11T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-09T00:00:00+0800
申请号：	CN201910290762.2
公开号：	CN110108691A
代理机构：	深圳益诺唯创知识产权代理有限公司
代理人：	肖婉萍
分类号：	G01N21/65(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	542899 广西壮族自治区贺州市八步区西环路18号
主权项：	1.一种基于DNA酶SERS技术测定荸荠皮中痕量汞离子的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤： a、制备已知浓度的Hg2+标准溶液体系：于刻度试管中，依次加入30～200μL 9nmol/L双链DNA溶液，10～150μL 1×10-5mol/L的Hg2+标准溶液，混匀室温下静置8min后，加入10～500μL 19.9mg/L银纳米粒子溶液，然后加入10～50μL 4.65×10-2mol/L混合溶液，摇匀后加入20～120μL 5.23×10-5mol/L的罗丹明6G溶液，加水定容至2.0mL； b、制备空白对照溶液体系：用步骤a中的方法不加Hg2+标准溶液制备空白对照溶液体系； c、分别取步骤a、b制备的Hg2+标准溶液体系及空白对照溶液体系于石英皿中，在拉曼光谱仪上，设定仪器参数，扫描获得体系的表面增强拉曼光谱，测定611cm-1处的SERS峰强度I，同时测定空白对照溶液体系的SERS峰强度I0，计算ΔI＝I0–I； d、以ΔI对Hg2+的浓度关系作工作曲线； e、荸荠皮中汞离子的测定：对荸荠皮进行消解，得到荸荠皮消解液，按照步骤a的方法制备样品溶液，其中，加入的Hg2+标准溶液替换为样品溶液，并按步骤c的方法测定样品溶液的SERS峰强度I样品，根据步骤d的工作曲线计算出样品溶液中Hg2+的含量。 2.如权利要求1所述的基于DNA酶SERS技术测定荸荠皮中痕量汞离子的方法，其特征在于，步骤a中，所述双链DNA溶液的制备方法为：在15mL的比色管中，依次加入0.5mL 0.144μmol/L的单链DNA，0.5mL 0.144μmol/L的Taq酶，360μL 2mol/L NaCl溶液，1.45mL pH7.2的三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液，5.19mL的超纯水，混匀后，于80℃水浴锅中水浴加热15min，水浴后取出自然冷却1.5h，即得到所述的双链DNA溶液，然后保存于4℃冰箱备用。 3.如权利要求2所述的基于DNA酶SERS技术测定荸荠皮中痕量汞离子的方法，其特征在于，所述三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲液的制备方法为：依次加入5.0mL 0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷、9.0mL 0.1mol/L HCl，混合均匀后定容到20mL。 4.如权利要求1所述的基于DNA酶SERS技术测定荸荠皮中痕量汞离子的方法，其特征在于，步骤a中，所述银纳米粒子溶液的制备方法为：量取40.0mL超纯水于100mL锥形瓶中，在转速为500r/p的磁力搅拌器搅拌下，依次加入3.5mL 10g/L柠檬酸三钠溶液和0.385mL 2.4×10-2mol/L AgNO3，搅拌混匀后，逐滴缓慢滴加4.0mL 0.5g/L NaBH4，溶液从浅黄色逐渐变为黄色，继续搅拌15min后，定容于50mL棕色容量瓶，得到19.9mg/L银纳米粒子溶液，于4℃冰箱保存。 5.如权利要求1所述的基于DNA酶SERS技术测定荸荠皮中痕量汞离子的方法，其特征在于，步骤a中，所述混合溶液的制备方法为：依次加入3.72mL 0.2mol/L乙二胺四乙酸二钠、5mL 2mol/L NaCl、0.5mL 0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷，混匀后定容到16mL。 6.如权利要求1所述的基于DNA酶SERS技术测定荸荠皮中痕量汞离子的方法，其特征在于，步骤a中，所述双链DNA溶液的体积为100μL，所述银纳米粒子溶液的体积为400μL，所述混合溶液的体积为30μL，所述罗丹明6G溶液的体积为80μL。 7.如权利要求1所述的基于DNA酶SERS技术测定荸荠皮中痕量汞离子的方法，其特征在于，步骤d中，所述Hg2+浓度与ΔI的线性回归方程为△I＝0.8685x+17.92，线性范围为2.5×10-8～7.5×10-7mol/L，相关系数平方值为0.9955。 8.如权利要求1所述的基于DNA酶SERS技术测定荸荠皮中痕量汞离子的方法，其特征在于，步骤e中，所述荸荠皮消解的制备方法为：称取0.4g30目的荸荠皮粉放入微波消解罐中，加入5mLHNO3、2mL30％H2O2，设置微波温度为100℃，压力分别为3、6、9atm，微波功率分别为1000W、1000W、2000W，分别保持5、7、5min进行消解，消解完全后，加热进行赶酸，定容10mL棕色容量瓶中得40mg/mL荸荠皮消解储备液，再将荸荠皮消解储备液稀释成8mg/mL的荸荠皮消解液。 9.如权利要求8所述的基于DNA酶SERS技术测定荸荠皮中痕量汞离子的方法，其特征在于，所述荸荠皮消解液的制备方法为：取2mL荸荠皮消解储备液，离心，取上清液，过滤，然后取1mL滤液样品稀释5倍，得8mg/mL荸荠皮消解液。 10.如权利要求1所述的基于DNA酶SERS技术测定荸荠皮中痕量汞离子的方法，其特征在于，步骤e中，所述相对标准偏差小于10％，回收率为101～105％。
所属类别：	发明专利