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原文传递一种基于SERS技术检测鱼肉中组胺的方法

专利名称：	一种基于SERS技术检测鱼肉中组胺的方法
摘要：	本发明公开了种基于SERS技术检测鱼肉中组胺的方法。其技术方案包括：1)利用油酸钠与十六烷基三甲基溴化铵双表面活性剂法制备金纳米棒，在其表面修饰上4‑巯基苯胺连接银离子，以抗坏血酸为还原剂，在其表面上还原出银层。2)将鱼肉粉碎成泥，等量分成若干份，加入不同浓度组胺的标准溶液混合均匀。加入无水乙醇与正己烷去除鱼肉样品中的油脂等物质，再加入磁珠富集样品中的组胺；3）将合成的棒状Au@Ag核壳结构纳米粒子修饰上NTA，加入到富集了组胺的磁珠中，形成磁珠/组胺/Au@Ag纳米粒子的三明治模型。利用激光拉曼光谱仪采集数据图谱，实现对鱼肉中组胺含量的超灵敏检测，本方法适用范围为0.2‑20ug/kg。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	福建师范大学
发明人：	周婷;廖玉琴;卢玉栋;游瑞云;吴阳;陈玉婷
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-11T00:00:00+0800
申请号：	CN201910695501.9
公开号：	CN110320199A
代理机构：	福州科扬专利事务所
代理人：	李晓芬
分类号：	G01N21/65(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	350300 福建省福州市福清市龙江街道校园新村一号福建师范大学研发中心
主权项：	1.一种基于SERS技术检测鱼肉中组胺的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1）改性棒状Au@Ag核壳结构纳米粒子制备：带内标4-巯基苯胺的棒状Au@Ag核壳结构纳米粒子作为SERS基底，修饰上N，N-双（羧甲基）-L-赖氨酸来捕获组胺的咪唑环，得改性棒状Au@Ag核壳结构纳米粒子； 2）功能化磁纳米粒子的制备：带羧基的磁纳米粒子用1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐处理，得功能化磁纳米粒子； 3）鱼肉样品的处理：分别去取3-7份质量均为2-10g的新鲜鱼肉泥，接着往鱼肉样品中加入组胺标准液，再先后加入4-8mL乙醇和6-10mL正己烷混匀，提取3-5次样品中的组胺，去下层清液作为待测样品；将步骤1）制备的改性棒状Au@Ag核壳结构纳米粒子与步骤2）制备的功能化磁纳米粒子各取100uL加入鱼肉样品中，形成磁珠/组胺/Au@Ag纳米粒子的三明治模型；将混合好后的磁纳米粒子/组胺/Au@Ag核壳结构纳米粒子样品滴在盖玻片上；利用激光拉曼光谱仪采集数据图谱，以内标的特征峰强度与组胺浓度建立工作曲线，并利用该工作曲线实现对鱼肉中组胺含量的检测。 2.根据权利要求1所述的一种基于SERS技术检测鱼肉中组胺的方法，其特征在于，步骤1）具体步骤如下：将100uL带内标4-巯基苯胺的棒状Au@Ag核壳结构纳米粒子与100uL浓度为10-3-10-8mol/L的N，N-双（羧甲基）-L-赖氨酸混合，搅拌0.5h，使得N，N-双（羧甲基）-L-赖氨酸上的氨基与带内标4-巯基苯胺的棒状Au@Ag核壳结构纳米粒子的银壳充分反应而修饰上。 3.根据权利要求2所述的一种基于SERS技术检测鱼肉中组胺的方法，其特征在于，棒状Au@Ag核壳纳米粒子制备方法如下：取5-30mL的制备好的金棒溶液，离心洗涤后，加入30μL0.2-20mM的4-巯基苯胺乙醇溶液，反应30min后，离心洗涤，用十六烷基三甲基氯化铵重分散至5-30mL得内标金棒溶液，取3-5mL内标金棒溶液，加入9mL 20mM的十六烷基三甲基氯化铵和35-75uL 100mM的硝酸银溶液，接着再加入140-300uL 100mM抗坏血酸溶液；静置70℃条件下反应3h后离心洗涤，重分散在3mL蒸馏水中，得棒状Au@Ag核壳纳米粒子。 4.根据权利要求3所述的一种基于SERS技术检测鱼肉中组胺的方法，其特征在于，金棒溶液的制备方法如下：向0.025mL 10mM氯金酸中依次加入1mL 0.1M的十六烷基三甲基溴化铵溶液和1mL 10mM的硼氢化钠溶液，反应30min，得到的金种子溶液；取0.8mL的金种子溶液与500mL生长液混合，接着加入1.25mL 64mM的抗坏血酸，30℃，不搅拌反应48h，得纳米金棒溶液。 5.根据权利要求4所述的一种基于SERS技术检测鱼肉中组胺的方法，其特征在于，生长液的制备方法如下：取7.0gCTAB和1.234g油酸钠加入250mL温度为50℃的蒸馏水中，反应至水温为30℃时停止；接着依次加入18mL 4mM硝酸银溶液不搅拌反应15min和1mM 250mL的氯金酸溶液，搅拌，反应90min，最后加入2.1mL 37%wt的盐酸溶液反应15min制得生长液。 6.根据权利要求3所述的一种基于SERS技术检测鱼肉中组胺的方法，其特征在于，步骤2）的具体步骤为：取100uL羧基化的磁纳米粒子，用PBS缓冲液洗涤两次后，加入100uL1-（3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐活化1h。 7.根据权利要求3所述一种基于SERS技术检测鱼肉中组胺的方法，其特征在于：所述硝酸银溶液和抗坏血酸溶液的体积比为1:4。 8.根据权利要求1所述一种基于SERS技术检测鱼肉中组胺的方法，其特征在于：步骤3）中所述的组胺标准液的浓度范围为10-3-10-8mol/L。 9.根据权利要求1所述的一种基于SERS技术检测鱼肉中组胺的方法，其特征在于：步骤3）的工作曲线为y=-4004.58x+33030.91。 10.根据权利要求1所述的一种基于SERS技术检测鱼肉中组胺的方法，其特征在于：鱼肉中组胺检测范围为0.2-20ug/kg。
所属类别：	发明专利