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原文传递一种用于痰喘药物组合物的质量检测方法

专利名称：	一种用于痰喘药物组合物的质量检测方法
摘要：	本发明涉及一种用于痰喘的药物组合物的质量检测方法，该质量检测方法具体为：对产品进行显微鉴别，利用薄层色谱法对产品中的芍药苷、欧前胡素、五味子醇甲、斯皮诺素进行薄层鉴别，利用高效液相色谱法对产品中的沉香四醇进行鉴别，利用高效液相色谱法对产品中的马兜铃酸A的含量进行检查，对重金属及有害元素进行检查，利用高效液相色谱法测定产品中的芍药苷含量、沉香四醇含量、甘草苷和甘草酸的含量，本方法进一步提升和控制了痰喘半夏颗粒的质量。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	贵州;52
申请人：	贵州远程制药有限责任公司
发明人：	程吉祥;刘青;罗天军;薛静;伍朝平;杨玉兰
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-13T00:00:00+0800
申请号：	CN201910434403.X
公开号：	CN110118834A
代理机构：	贵阳贵知知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	曾香兰;蒋琳琳
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	550018 贵州省贵阳市乌当区高新北路5号
主权项：	1.一种用于痰喘的药物组合物的质量检测方法，该组合物由制半夏、川贝母、肉桂、豆蔻、沉香、丁香、西洋参、白芷、细辛、天竺黄、朱砂、甘草、陈皮、川芎、麸炒枳壳、麸炒白术、麸炒青皮、泽泻、麸炒白芍、山楂、制五味子、酸枣仁、干姜、薄荷油制成，其特征在于：对产品进行显微鉴别，利用薄层色谱法对产品中的芍药苷、欧前胡素、五味子醇甲、斯皮诺素进行薄层鉴别，利用高效液相色谱法对产品中的沉香四醇进行鉴别，利用高效液相色谱法对产品中的马兜铃酸A的含量进行检查，对重金属及有害元素进行检查，利用高效液相色谱法测定产品中的芍药苷含量、沉香四醇含量、甘草苷和甘草酸的含量。 2.根据权利要求1所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于：所述对产品进行显微鉴别的方法为：取本品研细，粉末用水溶解，过滤，取滤渣透化或直接用水装片置显微镜下观察，具体特征如下：产品中制半夏的显微特征：淀粉粒圆形或类圆形，直径可至15～25μm，脐点多居中，呈短缝状、人字状，偏光下观察，脐点处汇聚的消光呈较对称的十字形；草酸钙针晶束，多断裂，长可至200～260μm；产品中川贝母的显微特征：淀粉粒广卵形、长椭圆形、贝壳形、肾形，直径可至38～46μm，脐点点状、短缝状、人字状、星状，多位于较小端，偏光下观察，脐点处汇聚的消光常呈不对称的十字形，或呈л形和乂形；产品中肉桂的显微特征：石细胞散在，多破碎，完整者呈类方形、类长方形、类圆形、圆多角形、椭圆形，直径32～60μm，壁厚，有的一面稍尖突，有的一面菲薄；纤维梭形，木化，边缘微波状，多断裂，长可至120～180μm，直径至40～60μm，璧极厚，孔沟不明显或稀少而细短，胞腔线形；产品中豆蔻的显微特征：胚乳细胞淀粉团，长类方形、类圆形、不规则形，长可至120～180μm，由众多细小淀粉粒集结而成；产品中沉香的显微特征：具缘纹孔导管碎片可见，具缘纹孔呈蜂窝状紧密排列；产品中朱砂的显微特征：不规则颗粒和碎片散在，大小不一，鲜红色或暗红色，部分具光泽。 3.根据权利要求1所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于：所述利用薄层色谱法对产品中的芍药苷进行薄层鉴别的方法为：取本品15～25g，研细，加乙醇40～60mL，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15～25mL使溶解，用水饱和正丁醇萃取2～4次，每次15～25mL，合并正丁醇液，用氨水洗涤2～4次，每次15～25mL，弃去氨水，取正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液，另取白芍对照药材0.5～1.5g，加乙醇15～25mL，同法制成对照药材溶液，再取芍药苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，作为对照品溶液，照通则0502薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各15μL，对照品溶液10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为40:5:7:0.2的二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 4.根据权利要求1所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于：所述利用薄层色谱法对产品中的欧前胡素进行薄层鉴别的方法为：取本品15～25g，研细，加乙醇20～40mL，超声处理15～25分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15～25mL使溶解，用60℃～90℃石油醚萃取2～4次，每次20～40mL，合并石油醚液，蒸干，残渣加60℃～90℃石油醚1mL使溶解，作为供试品溶液，另取白芷对照药材1g，加乙醇15～25mL，同法制成对照药材溶液；再取欧前胡素对照品，加甲醇制成每1mL含0.04mg的溶液，作为对照品溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8μL，对照药材溶液和对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为10:5:0.2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，在365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 5.根据权利要求1所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于：所述利用薄层色谱法对产品中的五味子醇甲进行薄层鉴别的方法为：取本品15～25g，加水40～60mL使溶解，离心5～15分钟，取上清液，置分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇提取2～4次，每次20～40mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2～4次，每次20～40mL，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，置中性氧化铝柱上，用甲醇20～40mL洗脱，收集洗脱液，浓缩至1mL作为供试品溶液；另取五味子对照药材1g，加甲醇10～30mL，超声处理10～30分钟，滤过，滤液浓缩至1mL，作为对照药材溶液；再取五味子醇甲对照品，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μL，对照药材溶液和对照品溶液各3μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以比例为12:4:0.4的甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，在254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 6.根据权利要求1所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于：所述利用薄层色谱法对产品中的斯皮诺素进行薄层鉴别的方法为：取本品5～15g，研细，加甲醇40～60mL，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水3～9mL使溶解，置SPE C18小柱6CC上，依次用水3～9mL，35～45％的甲醇溶液3～9mL洗脱，弃去洗脱液，再用80～90％甲醇溶液3～9mL洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩至1mL，作为供试品溶液；另取酸枣仁对照药材1g，加甲醇15～25mL，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干，加1mL甲醇使溶解，作为对照药材溶液，再取斯皮诺素对照品，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，作为对照品溶液，照通则0502薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μL，对照药材溶液和对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以水饱和正丁醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，晾干，在365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 7.根据权利要求1所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于：所述利用薄层色谱法对产品中的沉香四醇进行薄层鉴别的方法为：取本品10袋，混匀，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60～80％甲醇溶液15～25mL，称重，功率720W，频率40kHZ条件下超声处理20～40分钟，取出，再称重，用60～80％甲醇溶液补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取沉香对照药材0.5g，加60～80％甲醇溶液5～15mL，超声处理20～40分钟，滤过，取续滤液作为对照药材溶液，再取沉香四醇对照品，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液，照通则0512高效液相色谱法试验，分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液、对照品溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录；供试品色谱图中，应呈现与沉香四醇对照品保留时间相一致的色谱峰，并同时呈现与对照药材中另一特征峰保留时间相一致的色谱峰。所述高效液相色谱条件具体为：采用二极管阵列检测器DAD，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.5％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长250nm，理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于15000； 8.根据权利要求1所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于：所述利用高效液相色谱法对产品中的马兜铃酸A的含量检查方法为：马兜铃酸A 照高效液相色谱法测定；色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为38:62的乙腈～0.5％磷酸溶液为流动相；检测波长为270～350nm；理论塔板数按马兜铃酸A峰计算，应不低于30000；对照品溶液的制备取马兜铃酸A对照品，精密称定，加70％甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，摇匀，即得；供试品溶液的制备取本品20袋，混匀，研细，取约20g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇100～200mL，称重，摇匀，在功率720W，频率40kHZ条件下超声处理20～40分钟，取出，再称重，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过；精密吸取续滤液80～120mL，蒸干，残渣加0.5％氢氧化钠溶液20～40mL溶解，分次转移到分液漏斗中，用三氯甲烷萃取2～4次，每次20～30mL，弃去三氯甲烷液；水层用盐酸调pH至2，用三氯甲烷萃取2～5次，每次20～30mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移到10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，作为供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每袋含马兜铃酸A C17H11NO7，不得过1.00μg；重金属及有害元素照铅、镉、汞、砷、铜测定法(通则2321)测定，本品每袋含Hg应为20.2～33.8mg。 9.根据权利要求1所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于：利用高效液相色谱法测定产品中的芍药苷含量、沉香四醇含量、甘草苷和甘草酸的含量的方法为：含量测定白芍、甘草、沉香照通则0512高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验采用二极管阵列检测器DAD，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.5％磷酸溶液为流动相B，按规定进行梯度洗脱；芍药苷检测波长210～255nm、沉香四醇、甘草酸检测波长为210～310nm、甘草苷检测波长为215～317nm，理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于15000，所述梯度洗脱具体规定为：对照品溶液的制备取芍药苷、沉香四醇、甘草苷、甘草酸对照品适量，加70％甲醇溶液制成每1mL含芍药苷200μg、沉香四醇40μg、甘草苷100μg和甘草酸80μg的混合溶液，摇匀，即得；供试品溶液的制备取本品10袋，混匀，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50～90％甲醇溶液5～30mL，称重，功率720W，频率40kHZ条件下超声处理30～60分钟，取出，再称重，用60～80％甲醇溶液补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每袋含白芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于4.3mg；含沉香以沉香四醇C17H18O6计，不得少于1.0mg；含甘草以甘草苷C21H22O9和甘草酸C42H62O16计，分别不得少于2.0mg和1.8mg。 10.根据权利要求1所述的药物组合物的质量检测方法，其特征在于：该质量检测方法具体为： (一)鉴别： (1)取本品研细，粉末用水溶解，过滤，取滤渣透化或直接用水装片置显微镜下观察，具体特征如下：产品中制半夏的显微特征：淀粉粒圆形或类圆形，直径可至20μm，脐点多居中，呈短缝状、人字状，偏光下观察，脐点处汇聚的消光呈较对称的十字形；草酸钙针晶束，多断裂，长可至230μm；产品中川贝母的显微特征：淀粉粒广卵形、长椭圆形、贝壳形、肾形，直径可至43μm，脐点点状、短缝状、人字状、星状，多位于较小端，偏光下观察，脐点处汇聚的消光常呈不对称的十字形，或呈л形和乂形；产品中肉桂的显微特征：石细胞散在，多破碎，完整者呈类方形、类长方形、类圆形、圆多角形、椭圆形，直径32～60μm，壁厚，有的一面稍尖突，有的一面菲薄；纤维梭形，木化，边缘微波状，多断裂，长可至150μm，直径至50μm，璧极厚，孔沟不明显或稀少而细短，胞腔线形；产品中豆蔻的显微特征：胚乳细胞淀粉团，长类方形、类圆形、不规则形，长可至150μm，由众多细小淀粉粒集结而成；产品中沉香的显微特征：具缘纹孔导管碎片可见，具缘纹孔呈蜂窝状紧密排列；产品中朱砂的显微特征：不规则颗粒和碎片散在，大小不一，鲜红色或暗红色，部分具光泽； (2)取本品20g，研细，加乙醇50mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用水饱和正丁醇萃取2次，每次20mL，合并正丁醇液，用氨水洗涤3次，每次20mL，弃去氨水，取正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取白芍对照药材1g，加乙醇20mL，同法制成对照药材溶液；再取芍药苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各15μL，对照品溶液10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为40:5:7:0.2的二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (3)取本品20g，研细，加乙醇30mL，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用60℃～90℃石油醚萃取2次，每次30mL，合并石油醚液，蒸干，残渣加60℃～90℃石油醚1mL使溶解，作为供试品溶液；另取白芷对照药材1g，加乙醇20mL，同法制成对照药材溶液；再取欧前胡素对照品，加甲醇制成每1mL含0.04mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液8μL，对照药材溶液和对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为10:5:0.2的环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，在365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (4)取本品20g，加水50mL使溶解，离心10分钟，取上清液，置分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次30mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次30mL，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，置中性氧化铝柱上，用甲醇30mL洗脱，收集洗脱液，浓缩至1mL作为供试品溶液；另取五味子对照药材1g，加甲醇20mL，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至1mL，作为对照药材溶液；再取五味子醇甲对照品，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照通则0502薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5μL，对照药材溶液和对照品溶液各3μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以比例为12:4:0.4的甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，在254nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (5)取本品10g，研细，加甲醇50mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水6mL使溶解，置SPE C18小柱6CC上，依次用水6mL，40％的甲醇溶液6mL洗脱，弃去洗脱液，再用90％甲醇溶液6mL洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩至1mL，作为供试品溶液；另取酸枣仁对照药材1g，加甲醇20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，加1mL甲醇使溶解，作为对照药材溶液；再取斯皮诺素对照品，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μL，对照药材溶液和对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以水饱和正丁醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，晾干，在365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (6)取本品10袋，混匀，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇溶液20mL，称重，功率720W，频率40kHZ条件下超声处理30分钟，取出，再称重，用70％甲醇溶液补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取沉香对照药材0.5g，加70％甲醇溶液10mL，超声处理30分钟，滤过，取续滤液作为对照药材溶液；再取沉香四醇对照品，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照高效液相色谱法试验，分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液、对照品溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录；供试品色谱图中，应呈现与沉香四醇对照品保留时间相一致的色谱峰，并同时呈现与对照药材中另一特征峰保留时间相一致的色谱峰；所述高效液相色谱条件具体为：采用二极管阵列检测器DAD，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.5％磷酸溶液为流动相B，按以下的规定进行梯度洗脱；检测波长250nm，理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于15000； (二)检查马兜铃酸A 照通则0512高效液相色谱法测定；色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以比例为38:62的乙腈～0.5％磷酸溶液为流动相；检测波长为320nm；理论塔板数按马兜铃酸A峰计算，应不低于30000；对照品溶液的制备取马兜铃酸A对照品，精密称定，加70％甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，摇匀，即得；供试品溶液的制备取本品20袋，混匀，研细，取约20g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇150mL，称重，摇匀，功率720W，频率40kHZ条件下超声处理30分钟，取出，再称重，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过；精密吸取续滤液100mL，蒸干，残渣加0.5％氢氧化钠溶液30mL溶解，分次转移到分液漏斗中，用三氯甲烷萃取3次，每次25mL，弃去三氯甲烷液；水层用盐酸调pH至2，用三氯甲烷萃取4次，每次25mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移到10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，作为供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每袋含马兜铃酸A C17H11NO7，不得过1.00μg；重金属及有害元素照通则2321铅、镉、汞、砷、铜测定法测定，本品每袋含Hg应为20.2～33.8mg； (三)含量测定 (1)白芍、甘草、沉香照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验采用二极管阵列检测器DAD，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.5％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；芍药苷检测波长235nm、沉香四醇、甘草酸检测波长250nm、甘草苷检测波长272nm；理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于15000；对照品溶液的制备取芍药苷、沉香四醇、甘草苷、甘草酸对照品适量，加70％甲醇溶液制成每1mL含芍药苷200μg、沉香四醇40μg、甘草苷100μg和甘草酸80μg的混合溶液，摇匀，即得；供试品溶液的制备取本品10袋，混匀，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇溶液20mL，称重，功率720W，频率40kHZ的条件超声处理30分钟，取出，再称重，用70％甲醇溶液补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每袋含白芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于4.3mg；含沉香以沉香四醇C17H18O6计，不得少于1.0mg；含甘草以甘草苷C21H22O9和甘草酸C42H62O16计，分别不得少于2.0mg和1.8mg。
所属类别：	发明专利