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原文传递一种检测转基因BT蛋白和CP4-EPSPS蛋白的联检胶体金试纸条

专利名称：	一种检测转基因BT蛋白和CP4-EPSPS蛋白的联检胶体金试纸条
摘要：	一种检测转基因BT蛋白和CP4‑EPSPS蛋白的联检胶体金试纸条，其包括底板、固定在底板上依次相连的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；其中，结合垫上包被金标抗体复合物AuNPs‑BTmAb1和AuNPs‑CP4mAb1；硝酸纤维素膜上设质控线和两条检测线。该联检试纸条可以对含转基因抗虫蛋白BT‑Cry1Ab、BT‑Cry1Ac、BT‑Cry1Ab/Ac融合蛋白或抗除草剂蛋白CP4‑EPSPS的农作物同时快速检测，结果准确，具有良好的特异性和较高的灵敏度，降低对仪器及专业操作人员的依赖，克服单一靶标试纸条检测复合性状作物，或检测单一性状作物的复合物时的局限性，具有良好的应用前景。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海市农业科学院
发明人：	曾海娟;唐雪明;王金斌;贾军伟;白蓝
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-15T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201910300158.3
公开号：	CN110133279A
代理机构：	上海开祺知识产权代理有限公司
代理人：	张晓敏;费开逵
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	201106 上海市闵行区北翟路2901号
主权项：	1.一种检测转基因BT蛋白和CP4-EPSPS蛋白的联检胶体金试纸条，其包括底板、固定在底板上依次相连的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；其中，结合垫上包被有金标抗体复合物AuNPs-BTmAb1和金标抗体复合物AuNPs-CP4mAb1，所述金标抗体复合物AuNPs-BTmAb1为胶体金AuNPs与抗BT蛋白的鼠源性单克隆抗体BTmAb1耦连获得，所述BT蛋白为BT-Cry1Ab蛋白、BT-Cry1Ac蛋白或BT-Cry1Ab/Ac融合蛋白；金标抗体复合物AuNPs-CP4mAb1为胶体金AuNPs与抗CP4-EPSPS蛋白的鼠源性单克隆抗体CP4mAb1耦连获得；所述硝酸纤维素膜上靠近结合垫端平行设置BT检测线和CP4-EPSPS检测线，BT检测线由单克隆抗体BTmAb2构成，CP4-EPSPS检测线由单克隆抗体CP4mAb2构成；所述硝酸纤维素膜上设置质控线，在靠近吸水垫端的硝酸纤维素膜上包被羊抗鼠IgG抗体，作为质控线。 2.根据权利要求1所述检测转基因BT蛋白和CP4-EPSPS蛋白的联检胶体金试纸条，其特征在于，单克隆抗体CP4mAb1与胶体金耦连后以3-5％BSA封闭，单克隆抗体CP4mAb2的稀释缓冲液中添加1-3％BSA；单克隆抗体BTmAb1与胶体金耦连后以1-3％BSA进行封闭，单克隆抗体BTmAb2的稀释缓冲液中添加0.5-1％BSA。 3.根据权利要求1或2所述检测转基因BT蛋白和CP4-EPSPS蛋白的联检胶体金试纸条，其特征在于，所述金标抗体复合物AuNPs-BTmAb1中，单克隆抗体BTmAb1与胶体金的质量体积比为50-60μg：1mL；金标抗体复合物AuNPs-CP4mAb1中，单克隆抗体CP4mAb1与胶体金的质量体积比为60-72μg：1mL。 4.根据权利要求1所述检测转基因BT蛋白和CP4-EPSPS蛋白的联检胶体金试纸条，其特征在于，所述BT检测线上包被的单克隆抗体BTmAb2用量分别1.5-2.0mg/mL，CP4-EPSPS检测线上包被的单克隆抗体CP4mAb2的用量为1.5-2.0mg/mL。 5.根据权利要求1所述检测转基因BT蛋白和CP4-EPSPS蛋白的联检胶体金试纸条，其特征在于，所述金标抗体复合物AuNPs-BTmAb1中，鼠源性单克隆抗体BTmAb1的用量为1.5-2.0μg；金标抗体复合物AuNPs-CP4mAb1中，鼠源性单克隆抗体CP4mAb1的用量为1.0-1.5μg；所述质控线上抗鼠IgG抗体的抗体浓度为0.5-1mg/mL。 6.根据权利要求1所述检测转基因BT蛋白和CP4-EPSPS蛋白的联检胶体金试纸条，其特征在于，所述胶体金试纸条的底板后设有支撑背板。 7.根据权利要求1或6所述检测转基因BT蛋白和CP4-EPSPS蛋白的联检胶体金试纸条，其特征在于，所述胶体金试纸条还包括套设在底板外的外壳；所述外壳的壳体上开有加样孔和观察窗，所述加样孔设于对应所述样品垫上方的壳体处，所述观察窗设于对应所述纤维素膜上方的壳体处。 8.根据权利要求1所述检测转基因BT蛋白和CP4-EPSPS蛋白的联检胶体金试纸条，其特征在于，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫中，相邻部件之间设有1-2mm的重叠区。 9.根据权利要求1所述检测转基因BT蛋白和CP4-EPSPS蛋白的联检胶体金试纸条，其特征在于，所述样品垫、结合垫均为玻璃纤维，吸水垫为纤维素纤维；所述结合垫上的胶体金粒径为20-40nm；所述硝酸纤维素膜为CN95膜或CN140膜，所述硝酸纤维素膜的孔径为8-15μm。 10.如权利要求1所述联检胶体金试纸条在检测转基因植物中的应用，检测含转基因BT-Cry1Ab蛋白、BT-Cry1Ac蛋白或BT-Cry1Ab/Ac融合蛋白与CP4-EPSPS蛋白的复合性状转基因作物或几种单一性状转基因作物的复合物。
所属类别：	发明专利