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原文传递一种检测血清中5种雄激素的方法

专利名称：	一种检测血清中5种雄激素的方法
摘要：	本发明提供了一种检测血清中5种雄激素的方法，包括：将待测血清样品与内标溶液混合，采用混合提取溶剂，通过液‑液萃取前处理得到检测液，采用超高效液相色谱‑串联质谱技术对所述检测液进行检测；超高效液相色谱条件：流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为0.1％甲酸的甲醇溶液；质谱条件：正离子模式，采用多反应监测的质谱扫描模式；该5种雄激素为脱氢表雄酮、睾酮、雄烯二酮、双氢睾酮和雄酮。本发明的方法同时检测5种雄激素的检测时间仅5分钟，检测通量大；操作简便，耗时少；特异性强，灵敏度高，精密度高，检测限低，检测范围广，实际应用前景广阔。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	中南民族大学
发明人：	王献;刘琪;刘杨茜
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910340599.6
公开号：	CN110208393A
代理机构：	北京路浩知识产权代理有限公司
代理人：	王文君;陈征
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	430074 湖北省武汉市洪山区民族大道708号
主权项：	1.一种检测血清中5种雄激素的方法，其特征在于，所述雄激素为脱氢表雄酮、睾酮、雄烯二酮、双氢睾酮和雄酮；具体包括如下步骤： S1、将待测血清样品与内标溶液混合，通过液-液萃取前处理得到检测液； S2、采用超高效液相色谱-串联质谱技术结合同位素稀释内标法对所述检测液进行定量检测；所述内标溶液为含睾酮-D3和脱氢表雄酮-D6同位素内标物的甲醇溶液；所述超高效液相色谱条件为：流动相A为0.1％(v/v)甲酸水溶液；流动相B为0.1％(v/v)甲酸甲醇溶液；流动相梯度洗脱参数为：所述质谱条件为：离子化模式为正离子模式，检测采用多反应监测的质谱扫描模式。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质谱条件具体为：电离源为电喷雾电离ESI源，其中雾化气流量为1.5-3L/min，干燥气流量为3-8L/min，加热气流量为8-15L/min，接口温度150-250℃，DL温度80-125℃，加热块温度260-350℃；质谱检测参数为： 3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述流动相梯度洗脱参数为： 4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.4ml/min，色谱柱的柱温为40℃。 5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述加热气流量为8L/min，接口温度200℃，DL温度100℃，加热块温度300℃。 6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤S1中，所述前处理为使用甲醇与甲基叔丁基醚的混合溶液进行液-液萃取前处理；优选地，所述前处理具体包括：向待测血清样品与内标溶液的混合液中加入800-1000μL体积比为1：5的甲醇与甲基叔丁基醚的混合溶液，震荡后在10000-15000r/min，2-5℃下冷冻离心2-6min，取上层清液400-800μL，N2气吹干，加入80-150μL的50-70％甲醇溶液复溶，混合均匀，在10000-15000r/min、2-5℃下冷冻离心2-6min，取上层清液，得到所述检测液。 7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，还包括，结合步骤S2得到的检测结果和各雄激素的标准工作曲线，得到各雄激素在血清中的含量值。 8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述雄激素的标准工作曲线采用同位素内标定量法制得，具体步骤包括：将已知且不同浓度的脱氢表雄酮、睾酮、雄烯二酮、双氢睾酮和雄酮的甲醇溶液分别与内标溶液和空白血清基质混合，经过前处理得到不同浓度的标准待测液，使用超高效液相色谱-串联质谱技术对所述不同浓度的标准待测液分别进行检测，以标准检测液中各雄激素与内标物峰面积比为Y轴，标准检测液中各雄激素浓度为X轴，得到各雄激素的标准工作曲线；所述超高效液相色谱-串联质谱技术中的检测条件为步骤S2中的检测条件。 9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述空白血清基质为胎牛血清。
所属类别：	发明专利