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原文传递一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白sST2发光试剂盒

专利名称：	一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白sST2发光试剂盒
摘要：	本发明提供了一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白sST2发光试剂盒，所述试剂盒包括R1试剂、R2试剂、磁分离试剂，所述R1试剂包括异硫氰酸荧光素标记的抗人sST2单克隆抗体；所述R2试剂包括碱性磷酸酶标记的抗人sST2单克隆抗体；所述磁分离试剂包括抗异硫氰酸荧光素抗体标记的磁性微粒；本发明通过与全自动化学免疫发光仪联用，大大降低了操作难度和检测时间；控制了检测成本的同时，有效提高了sST2检测的灵敏度、线性范围、准确度和重复性，具有极强的市场推广潜力。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京利德曼生化股份有限公司
发明人：	王鹏;李冉;郭建夫
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-01T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910586160.1
公开号：	CN110208549A
代理机构：	北京久维律师事务所
代理人：	邢江峰
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100000 北京市大兴区经济技术开发区兴海路5号
主权项：	1.一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白sST2发光试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括R1试剂、R2试剂、磁分离试剂；所述R1试剂包括异硫氰酸荧光素标记的抗人sST2单克隆抗体；所述R2试剂包括碱性磷酸酶标记的抗人sST2单克隆抗体；所述磁分离试剂包括抗异硫氰酸荧光素抗体标记的磁性微粒。 2.根据权利要求1所述的一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白sST2发光试剂盒，其特征在于：所述异硫氰酸荧光素标记的抗人sST2单克隆抗体浓度为0.5—2.0μg/mL，碱性磷酸酶标记的抗人sST2单克隆抗体浓度为0.5—2.0μg/mL，所述抗异硫氰酸荧光素抗体标记的磁性微粒的浓度为0.5—2.0mg/mL。 3.根据权利要求1或2所述的一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白sST2发光试剂盒，其特征在于：所述R1试剂还包括牛血清白蛋白、酪蛋白、动物血清、异噬性抗体阻断剂、防腐剂和缓冲液。 4.根据权利要求3所述的一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白sST2发光试剂盒，其特征在于：所述异嗜性抗体阻断剂浓度为10-100ug/mL。 5.根据权利要求1或2所述的一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白sST2发光试剂盒，其特征在于：所述R2试剂和磁分离试剂，分别还包括牛血清白蛋白、酪蛋白、动物血清、防腐剂和缓冲液。 6.根据权利要求5所述的一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白sST2发光试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括校准品液，所述校准品液包括重组人sST2抗原、牛血清白蛋白、酪蛋白、动物血清、防腐剂和缓冲液，所述重组人sST2抗原浓度分别为0.0ng/mL、5.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、150.0ng/mL和300.0ng/mL之一。 7.根据权利要求6所述的一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白sST2发光试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括质控品液，所述质控品液包括重组人sST2抗原、牛血清白蛋白、动物血清、防腐剂和缓冲液，所述sST2抗原浓度分别为30.0ng/mL和150.0ng/mL之一。 8.根据权利要求7所述的一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白sST2发光试剂盒，其特征在于：所述牛血清白蛋白的质量百分比浓度为0.5—5.0％，所述动物血清选自羊血清、牛血清、马血清和鸡血清中的一种，动物血清的质量百分比浓度为0.5—5.0％。 9.根据权利要求1所述的一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白sST2发光试剂盒，其特征在于：所述R1试剂包括异硫氰酸荧光素标记的抗人sST2单克隆抗体的制备方法，包括如下步骤： Q1、将抗人sST2单克隆抗体采用pH为9.0的碳酸盐缓冲液过夜透析； Q2、采用0.2M的碳酸氢钠溶液配制0.2—1mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液； Q3、向Q1处理后的抗人sST2单克隆抗体中加入Q2制备的异硫氰酸荧光素溶液，混匀，室温反应20h，然后采用pH为9.0的碳酸盐缓冲液过夜透析即得；其中，每毫克抗人sST2单克隆抗体加入0.15mL的异硫氰酸荧光素溶液。 10.根据权利要求1所述的一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白sST2发光试剂盒，其特征在于：所述R2试剂中，碱性磷酸酶标记的抗人sST2单克隆抗体的制备方法，包括如下步骤： Q1、配制10—15mg/mL的2-亚氨基硫羟烷盐酸盐溶液； Q2、取抗人sST2单克隆抗体置于试管中，加入2-亚氨基硫羟烷盐酸盐溶液，混匀，室温放置20—60min，得活化的抗人sST2单克隆抗体； Q3、称取碱性磷酸钠置于试管中，碱性磷酸钠的质量为抗人sST2单克隆抗体质量的0.5—1.5倍； Q4、向装有碱性磷酸钠的试管中加入5—10mg/mL的Sulfo-SMCC溶液，混匀，室温放置10—30min，得活化的碱性磷酸钠； Q5、向装有活化的抗人sST2单克隆抗体的试管中加入1M的MgCl2溶液，然后加入活化的碱性磷酸钠，4℃放置12—20h； Q6、利用蛋白质纯化系统收集Q5中制得的碱性磷酸酶标记的抗抗人sST2单克隆抗体。 11.根据权利要求1所述的一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白sST2发光试剂盒，其特征在于：所述磁分离试剂中抗异硫氰酸荧光素抗体标记的磁性微粒的制备方法，包括如下步骤： Q1、磁微粒加磁场，用pH值为3.5—5.5的MES缓冲液清洗，然后采用MES缓冲液悬浮磁微粒，得磁微粒浓度为50mg/mL的悬浮液； Q2、向悬浮液中加入抗异硫氰酸荧光素抗体，混匀；其中每毫升悬浮液中加入0.5—2.5mg的抗异硫氰酸荧光素抗体； Q3、向Q2处理后的悬浮液中加入10mg/mL的EDC溶液；其中悬浮液和EDC溶液的体积比为1:1，搅拌2—6h，然后加磁场，静置10—30min，倒出上清液，即得。
所属类别：	发明专利