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原文传递一种利用α-溶血素纳米孔检测铜离子的方法

专利名称：	一种利用α-溶血素纳米孔检测铜离子的方法
摘要：	本发明涉及一种利用α‑溶血素纳米孔检测铜离子的方法，属于铜离子检测技术领域。上述方法包括：步骤1：α‑溶血素纳米孔的组装；步骤2：利用上述α‑溶血素纳米孔检测不同浓度铜离子样品，建立信号频率与铜离子浓度的工作曲线；步骤3：检测未知铜离子浓度样品中铜离子的信号频率，利用上述工作曲线计算铜离子浓度。本发明只涉及两个单链DNA底物探针，在铜离子和抗坏血酸钠存在的情况下，能够催化点击反应的发生，两条DNA探针通过点击反应成分叉DNA，利用纳米孔检测具有较高的灵敏度和特异性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	临沂大学
发明人：	郗冬梅;谢贝贝;刘丽萍;房真
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-05T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201910365826.0
公开号：	CN110133065A
代理机构：	青岛致嘉知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	单虎
分类号：	G01N27/26(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	276000 山东省临沂市兰山区双岭路中段
主权项：	1.一种利用α-溶血素纳米孔检测铜离子的方法，其特征在于，包括：步骤1：α-溶血素纳米孔的组装；步骤2：利用上述α-溶血素纳米孔检测不同浓度铜离子样品，建立信号频率与铜离子浓度的工作曲线；步骤3：检测未知铜离子浓度样品中铜离子的信号频率，利用上述工作曲线计算铜离子浓度。 2.根据权利要求1所述的利用α-溶血素纳米孔检测铜离子的方法，其特征在于，所述步骤1具体为：用貂毛笔在trans检测池的小孔内外两侧均匀涂抹磷脂溶液；将cis检测池和trans检测池组装后分别加入1M KCl电解质溶液，将一对Ag/AgCl电极浸入电解质溶液中，通过电流放大器探头向磷脂双分子层膜两端施加电压，使用提拉法在trans池的小孔处形成磷脂双分子层膜；在cis检测池中加入α-溶血素，当α-溶血素在磷脂双分子层膜上自组装形成一个稳定的纳米通道时，离子流将量子化阶跃；在+150mV电压条件下，单个纳米孔的稳定开孔电流为150±10pA。 3.根据权利要求1所述的利用α-溶血素纳米孔检测铜离子的方法，其特征在于，所述步骤2具体为： 21)将不同浓度的铜离子溶液分别与DNA探针、还原剂和铜离子螯合剂混合均匀，在30℃下孵育2h； 22)将上述步骤21)的样品注入cis检测池，在外加电场+150mV的驱动下，待测物逐一通过α-溶血素纳米孔，产生特征性的阻断电流信号； 23)实时观测并记录阻断电流信号，建立铜离子浓度和阻断电流信号频率之间的线性关系。 4.根据权利要求3所述的利用α-溶血素纳米孔检测铜离子的方法，其特征在于，所述步骤21)中，铜离子浓度分别为5μM、1μM、0.1μM、10-2μM、10-3μM、10-4μM。 5.根据权利要求4所述的利用α-溶血素纳米孔检测铜离子的方法，其特征在于，所述DNA探针为C10(5’-CCCCCC(azide)CCCC-3’)和C6(5’-CCCCCC(alkyne)-3’)，所述C10与C6的浓度为100μM。 6.根据权利要求5所述的利用α-溶血素纳米孔检测铜离子的方法，其特征在于，所述还原剂为抗坏血酸；所述铜离子螯合剂为三羟丙基三唑甲基胺。 7.根据权利要求6所述的利用α-溶血素纳米孔检测铜离子的方法，其特征在于，所述C10、C6、三羟丙基三唑甲基胺和抗坏血酸混合后，使用PBS溶液调整液体体积，使得C10、C6、三羟丙基三唑甲基胺和抗坏血酸的最终浓度分别为10μM、10μM、1mM和1mM。
所属类别：	发明专利