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原文传递一种高寒区野生老芒麦染色体制片方法

专利名称：	一种高寒区野生老芒麦染色体制片方法
摘要：	本发明公开了一种高寒区野生老芒麦染色体制片方法，涉及农业技术领域。本发明方法包括：(1)准备根尖材料；(2)对所述材料进行预处理；(3)对预处理过的材料进行固定、保存，固定时间为18‑24h；(4)对固定后的材料进行解离，室温下解离时间为50‑80min，60℃恒温水浴下解离时间为8‑18min；(5)对解离后的材料进行媒染及染色，染色时间为2‑10h；(6)对染色后的材料进行软化，软化时间为30‑60min；(7)对软化后的材料进行压片；(8)对压片样品进行镜检。本发明方法操作简单方便，使获得的染色体分散均匀，背景浅，易于观察，得出的染色体数目准确度高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	甘肃;62
申请人：	甘肃农业大学
发明人：	祁娟;金鑫;师尚礼;焦婷;刘黎;陈建纲;方强恩;刘欢;刘艳君;吴召林
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-18T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201910526616.5
公开号：	CN110132691A
代理机构：	北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司
代理人：	董芙蓉
分类号：	G01N1/30(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	730070 甘肃省兰州市安宁区营门村1号
主权项：	1.一种高寒区野生老芒麦染色体制片方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： (1)准备根尖材料； (2)对所述材料进行预处理； (3)对预处理过的材料进行固定、保存，固定时间为18-24h； (4)对固定后的材料进行解离，室温下解离时间为50-80min，60℃恒温水浴下解离时间为8-18min； (5)对解离后的材料进行媒染及染色，染色时间为2-10h； (6)对染色后的材料进行软化，软化时间为30-60min； (7)对软化后的材料进行压片； (8)对压片样品进行镜检。 2.如权利要求1所述的一种高寒区野生老芒麦染色体制片方法，其特征在于，所述固定时间为22-24h。 3.如权利要求1所述的一种高寒区野生老芒麦染色体制片方法，其特征在于，所述室温下解离时间为70-80min；所述60℃恒温水浴下解离时间为12-15min。 4.如权利要求1所述的一种高寒区野生老芒麦染色体制片方法，其特征在于，所述染色时间为5-7h。 5.如权利要求1所述的一种高寒区野生老芒麦染色体制片方法，其特征在于，所述软化时间为40-45min。 6.如权利要求1所述的一种高寒区野生老芒麦染色体制片方法，其特征在于，所述固定时间为24h；所述60℃恒温水浴下解离时间为12min。 7.如权利要求1所述的一种高寒区野生老芒麦染色体制片方法，其特征在于，所述染色时间为6h；所述软化时间为40min。 8.如权利要求1所述的一种高寒区野生老芒麦染色体制片方法，其特征在于，所述步骤(1)具体操作包括：挑选颗粒饱满大小均一的野生老芒麦种子，用浓度1％的高锰酸钾溶液消毒5～10min，用蒸馏水冲洗5～6次，置于垫有湿滤纸的培养皿中，放置于25℃的恒温箱内发芽；所述步骤(2)具体操作包括：待根长1～1.5cm，挑选粗壮的根尖，剪取0.5cm左右，浸入浓度为2mmol/L的8-羟基喹啉溶液中，放到暗处预处理时间2h，4h，处理时间2h，4h；4h处理时，分为直接处理4h和期间每两小时更换一次溶液。 9.如权利要求1所述的一种高寒区野生老芒麦染色体制片方法，其特征在于，所述步骤(3)具体操作包括：将预处理过的幼根根尖用蒸馏水冲洗3～5次，放入卡诺液，即无水乙醇：冰乙酸＝3：1中，固定18h、19h、20h、21h、22h、23h、24h；将固定后的根尖用蒸馏水彻底清洗干净，然后放入70％酒精中，于4℃冰箱中保存备用；所述步骤(4)具体操作包括：将固定完或保存于酒精中的幼根用蒸馏水彻底清洗干净后将其放入1mol/L HCl中；在室温下解离，解离时间为50min、60min、70min、80min；在60℃下恒温水浴条件下解离，解离时间为8min、10min、12min、14min、16min、18min；所述步骤(5)具体操作包括：将解离完的幼根用蒸馏水清洗干净，再用4％硫酸铁铵水溶液媒染4h后，将媒染后的幼根用蒸馏水冲洗干净后，用0.5％苏木色精水溶液染色2h、4h、6h、8h、10h。 10.如权利要求1所述的一种高寒区野生老芒麦染色体制片方法，其特征在于，所述步骤(6)具体操作包括：将染好色的幼根用蒸馏水清洗干净后置于45％冰醋酸中软化30min、35min、40min、45min、50min、55min、60min；所述步骤(7)具体操作包括：在洁净的载玻片上切取根尖1mm左右，加一滴45％乙酸，盖上盖玻片；取两张滤纸对折，将放有根尖的载玻片放置其中，用橡皮轻敲盖玻片，使根尖细胞散开，用拇指挤压盖玻片，使其在载玻片上呈现雾状，而后放置在显微镜下观察；所述步骤(8)具体操作包括：将载玻片放置在载物台上，然后先在10倍镜下找分散较好的细胞并移入视野中央，接着换40倍镜下寻找清晰地处于细胞分裂中期的图像进行观察，观察根尖所有的视野，以染色体的清晰程度、分散及聚缩程度等作为判断染色体效果观察图的标准。
所属类别：	发明专利