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原文传递人体尿液中人工合成雌激素物质的检测分析方法

专利名称：	人体尿液中人工合成雌激素物质的检测分析方法
摘要：	本发明公开了一种人体尿液中人工合成雌激素物质的检测分析方法，通过固相萃取的前处理结合高效液相色谱—质谱仪的技术同时检测人体尿液中5种人工合成雌激素类物质，步骤如下：先将尿液样品酶解，并加入内标物；然后使用固相萃取小柱提取、净化样品中人工合成雌激素物质；再通过高效液相色谱—质谱仪检测尿液中目标物的含量。本发明对尿液样品的处理步骤简单，操作方便，稳定性好，能够快速得到适于液质联用仪检测的样品。本发明方法能同时对5种人工合成雌激素物质进行快速高效地检测，检测速度快，自动化程度高，响应灵敏，回收率能达到80.16‑103.47％，便于产业化应用，是一种简便、快捷、准确的定性定量检测方法，适于推广应用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海大学
发明人：	江杨诚;王思齐;王云;胡建成;姚萃
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-15T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201910400546.9
公开号：	CN110133130A
代理机构：	上海上大专利事务所(普通合伙)
代理人：	顾勇华
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	200444 上海市宝山区上大路99号
主权项：	1.一种人体尿液中人工合成雌激素物质的检测分析方法，其特征在于，包括如下步骤： a.样品的预处理：在尿液样本中加入β-葡萄糖醛酸酶及内标BPA-d16，使混合液混匀后酶解至少6h，得到尿液预处理液，作为试样备用； b.使用固相萃取柱进行富集净化，过柱的具体流程为：首先将固相萃取柱用至少5mL甲醇活化，然后用至少5mL超纯水进行淋洗，流真空泵抽干至完全干燥，再用至少3mL甲醇进行洗脱至试管中；然后采用氮吹近干后用1mL甲醇定容，然后转移到液相色谱瓶中用于检测； c.液相色谱—质谱仪测定样品中目标物的含量：建立目标污染物的标准曲线，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标；采用外标法，在液相色谱—质谱仪上定量检测在所述步骤b中转移到液相色谱瓶中的样品内目标物的浓度，从而实现对人体尿液中人工合成雌激素物质的检测分析。 2.根据权利要求1所述人体尿液中人工合成雌激素物质的检测分析方法，其特征在于：在所述步骤a中，按照每4.5mL尿液样本加入至少1.0mL的400kU/mL的β-葡萄糖醛酸酶和至少0.5mL的浓度不低于100μg/mL的内标BPA-d16的配比比例，使混合液混匀后进行酶解反应。 3.根据权利要求1所述人体尿液中人工合成雌激素物质的检测分析方法，其特征在于：在所述步骤b中，活化、淋洗过程中流速均控制在1-3mL/min；洗脱时控制流速不大于1mL/min，抽干过程为45-60min。 4.根据权利要求1所述人体尿液中人工合成雌激素物质的检测分析方法，其特征在于：能够同时检测包括己烯雌酚、炔雌醇、孕二烯酮、醋酸甲羟孕酮、美仑孕酮醋酸酯中5种人工合成雌激素物质中的任意几种。 5.根据权利要求1所述人体尿液中人工合成雌激素物质的检测分析方法，其特征在于：在所述步骤c中，所述液相色谱—质谱仪的检测条件为：柱温为40℃，进样体积为10μL，流速为0.4mL/min；流动相采用HPLC级甲醇(A)和超纯水(B)；梯度(％A)如下：0min，5％；5min，55％；9min，60％；13min，75％；17.5min，85％；25min，90％；干燥气体流量：8L/min，干燥气体温度：300℃，鞘气体温度：350℃，鞘层气体流量：11L/min，雾化器压力：45psi，喷嘴电压(-)：1500V，喷嘴电压(+)：1500V，毛细管电压(-)：4500。 6.根据权利要求1所述人体尿液中人工合成雌激素物质的检测分析方法，其特征在于，在所述步骤c中，控制人体尿液中人工合成雌激素物质的检测定量限范围在0.005-0.02ng/mL之间。
所属类别：	发明专利