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原文传递一种适配体传感器及其制备方法和应用

专利名称：	一种适配体传感器及其制备方法和应用
摘要：	本发明公开了一种适配体传感器及其制备方法和应用，以UiO‑66‑NH2金属有机框架材料作为负载基质包埋信号分子三(2，2'‑联吡啶)二氯化钌，获得UiO‑66‑NH2/Ru(bpy)32+作为发光体，并利用其表面的氨基与羧基修饰的SDNA1结合。SDNA1通过碱基互补配对与凝血酶适配体结合，致使生物结合物apt1‑金纳米粒子固定在电极表面，金纳米粒子的等离子共振作用可以增强UiO‑66‑NH2/Ru(bpy)32+的ECL强度，提高适配体传感器的灵敏度。当加入目标物凝血酶时，其与适配体DNA apt1特异性结合致使Au NPs‑apt1逐渐从电极表面脱落，金纳米粒子的增强效果减弱，达到检测凝血酶的目的。该方法可以避免背景信号的干扰，光信号稳定，灵敏度高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	安徽;34
申请人：	安徽师范大学
发明人：	王广凤;冯秀云
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-11T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201910504979.9
公开号：	CN110132946A
代理机构：	芜湖安汇知识产权代理有限公司
代理人：	尹婷婷
分类号：	G01N21/76(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	241000 安徽省芜湖市弋江区花津南路安徽师范大学
主权项：	1.一种适配体传感器的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤： (1)UiO-66-NH2材料与三(2，2'-联吡啶)二氯化钌溶解在DMF中，90℃下搅拌12h，产物经清洗、离心、干燥，得到UiO-66-NH2/Ru(bpy)32+材料； (2)将UiO-66-NH2/Ru(bpy)32+材料溶解在PBS缓冲溶液中； (3)在抛光处理后的玻碳电极上滴加含有UiO-66-NH2/Ru(bpy)32+的PBS缓冲溶液，自然晾干，再向玻碳电极上滴加nafion溶液，得到修饰了UiO-66-NH2/Ru(bpy)32+的玻碳电极； (4)将SDNA1、apt1序列分别溶解在PBS缓冲溶液中，得到SDNA1缓冲溶液和apt1缓冲溶液； (5)将apt1缓冲溶液加入到金纳米粒子溶液中，培养，制备成apt1-金纳米粒子溶液； (6)将步骤(3)得到玻碳电极浸入SDNA1缓冲溶液中，培养，得到修饰了SDNA1的玻碳电极； (7)将步骤(6)得到的玻碳电极浸入牛血清白蛋白(BSA)溶液中，培养，清洗； (8)将步骤(7)得到的玻碳电极浸入步骤(5)得到的apt1-金纳米粒子溶液中，培养，清洗，即可得到基于UiO-66-NH2/Ru(bpy)32+的适配体传感器。 2.根据权利要求1所述的适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述三(2，2'-联吡啶)二氯化钌在DMF中的浓度为0.2mg/mL；所述UiO-66-NH2材料的粒径为80～150nm；所述UiO-66-NH2材料与三(2，2'-联吡啶)二氯化钌的质量之比为10:1。 3.根据权利要求1所述的适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述PBS缓冲溶液的浓度为0.1M，pH为7.4；UiO-66-NH2/Ru(bpy)32+在PBS缓冲溶液中的浓度为20mg/mL。 4.根据权利要求1所述的适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述含有UiO-66-NH2/Ru(bpy)32+的PBS缓冲溶液体积为10μL，nafion溶液的质量浓度为5％，体积为3μL。 5.根据权利要求1所述的适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述SDNA1缓冲溶液、apt1缓冲溶液的浓度均为100μM；所述SDNA1、apt1序列分别为： SDNA1：COOH-ACACACCCAACCACACCAACCTGC； apt1：SH-TGTTGTGTTTGGGCAGGTTGGTGTGGTTGG。 6.根据权利要求1所述的适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(5)具体包括以下步骤：将15μL apt1缓冲溶液加入到500μL金纳米粒子溶液中，20～30℃下培养10h，制备成apt1-金纳米粒子溶液。 7.根据权利要求1所述的适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(6)中，所述SDNA1缓冲溶液的浓度为1μM；所述培养是在4℃下培养10-12h。 8.根据权利要求1所述的适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤(7)中，所述牛血清白蛋白溶液的质量浓度为0.5％；所述培养的时间为1h；步骤(8)中，所述培养是指在37℃下培养1.5-2h。 9.根据权利要求1-8任意一项所述的制备方法制备得到的适配体传感器在凝血酶检测中的应用。 10.一种凝血酶的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：将根据权利要求1-8任意一项所述的制备方法制备得到的适配体传感器浸入不同浓度的含有凝血酶的缓冲溶液中，培养，清洗，并将所获得的修饰电极浸入电解液中，进行电致化学发光(ECL)检测，构建电极的ECL信号强度与凝血酶浓度的线性关系，进而实现对凝血酶的定量检测。
所属类别：	发明专利