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原文传递一种检测传染性喉气管炎病毒的试纸条，制备方法，检测方法及试剂盒

专利名称：	一种检测传染性喉气管炎病毒的试纸条，制备方法，检测方法及试剂盒
摘要：	本发明公开了一种检测传染性喉气管炎病毒的试纸条，制备方法，检测方法及试剂盒，涉及传染性喉气管炎病毒检测技术领域，具体包括底板以及与底板上边缘粘结的吸水材料，在底板上表面沿层析方向依次铺设有样品垫，胶体金结合垫和预先点有T线和C线的硝酸纤维素膜，且硝酸纤维素膜的上边缘与吸水材料的下边缘搭接，硝酸纤维素膜的下边缘与胶体金结合垫的上边缘粘结，胶体金结合垫的下边缘与样品垫的上边缘粘结，T线上包被有传染性喉气管炎病毒单克隆抗体。该试纸条检测传染性喉气管炎病毒特异性高，重复性好，灵敏度高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	四川;51
申请人：	四川省畜牧科学研究院
发明人：	康润敏;叶健强;谢晶;于吉锋;林毅;曹冶;李兴玉;叶勇刚;肖璐;潘梦
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-19T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910534240.2
公开号：	CN110146702A
代理机构：	北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	覃蛟
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	610000 四川省成都市锦江区牛沙路7号
主权项：	1.一种检测传染性喉气管炎病毒的试纸条，其特征在于，包括底板以及与底板上边缘粘结的吸水材料，在所述底板上表面沿层析方向依次铺设有样品垫，胶体金结合垫和预先点有T线和C线的硝酸纤维素膜，且所述硝酸纤维素膜的上边缘与所述吸水材料的下边缘搭接，所述硝酸纤维素膜的下边缘与所述胶体金结合垫的上边缘粘结，所述胶体金结合垫的下边缘与所述样品垫的上边缘粘结，所述T线上包被有传染性喉气管炎病毒单克隆抗体。 2.根据权利要求1所述的检测传染性喉气管炎病毒的试纸条，其特征在于，所述胶体金结合垫上添加有胶体金－传染性喉气管炎病毒单克隆抗体结合物，优选的，所述胶体金－传染性喉气管炎病毒单克隆抗体结合物为胶体金－传染性喉气管炎病毒单克隆抗体结合物的稀释液，所述胶体金－传染性喉气管炎病毒单克隆抗体结合物的稀释比例为1：3－4.2，单位体积胶体金标记所述传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的最低量为10ug；优选的，所述稀释比例为1：4。 3.根据权利要求1所述的检测传染性喉气管炎病毒的试纸条，其特征在于，所述T线上传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的添加量为36－51ug，所述C线上包被有X抗鼠IgG抗体，所述X为羊，兔，猪，马和猴中的任意一种，所述X抗鼠IgG抗体的添加量为24－30ug；优选的，所述T线上传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的添加量为45ug，所述C线上包被有羊抗鼠IgG抗体，所述羊抗鼠IgG抗体的添加量为30ug。 4.根据权利要求1所述的检测传染性喉气管炎病毒的试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜为Millipore HF135，Whatman Immunopore PR，Whatman PRIMA40和赛多利斯CN140中的任意一种；优选的，所述硝酸纤维素膜为赛多利斯CN140。 5.一种如权利要求1-4任一项所述的检测传染性喉气管炎病毒的试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)提供吸水材料、预先点有T线和C线的硝酸纤维素膜、胶体金结合垫和样品垫，所述T线上预先包被有传染性喉气管炎病毒单克隆抗体； (2)将所述吸水材料、所述硝酸纤维素膜、所述胶体金结合垫以及所述样品垫依次铺设在底板上，使所述硝酸纤维素膜的上边缘与所述吸水材料的下边缘搭接，所述硝酸纤维素膜的下边缘与所述胶体金结合垫的上边缘粘结，所述胶体金结合垫的下边缘与所述样品垫的上边缘粘结，以形成检测试纸条大板。 6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，制备所述预先点有T线和C线的硝酸纤维素膜具体包括如下步骤：先用PBS将传染性喉气管炎病毒单抗和X抗鼠IgG抗体分别稀释至1.2－1.7mg/ml和0.8－1.1mg/ml，然后在硝酸纤维素膜上以1ul/cm的点样量喷涂传染性喉气管炎病毒单抗作为T线，以1ul/cm的点样量喷涂X抗鼠IgG抗体作为C线，同时保证T线与C线的距离为0.5－0.8cm；优选的，所述T线与C线的距离为0.5cm。 7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，还包括胶体金结合垫的制备，具体包括用胶体金在pH为8.0-8.1的条件下标记传染性喉气管炎病毒单克隆抗体；优选的，胶体金在pH为8.0的条件下标记传染性喉气管炎病毒单克隆抗体。 8.一种使用如权利要求1-4任一项所述的试纸条检测传染性喉气管炎病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：在样品垫上加入待检样本20－100ul，在加样5－10min后观察显色结果。 9.根据权利要求8所述的试纸条检测传染性喉气管炎病毒的方法，其特征在于，所述待检样本为血清，血浆，细胞培养物上清，尿液，动物组织裂解液和植物组织裂解液中的任意一种。 10.一种传染性喉气管炎病毒检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的试纸条，所述检测试剂盒的检测限为100ng/ml。
所属类别：	发明专利