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原文传递一种测定杀菌剂对小麦条锈菌毒力的方法

专利名称：	一种测定杀菌剂对小麦条锈菌毒力的方法
摘要：	本发明涉及一种测定杀菌剂对小麦条锈菌毒力的方法，属于物保护领域。本发明采用条锈菌夏孢子悬浮液喷雾接种、制备保鲜培养基、离体叶段药剂处理、检测等步骤来测定三唑酮对小麦条锈菌毒力的抑制情况。本发明采用离体叶段的方式代替整株进行试验，有利于在测试过程中解决测试样本的用量大以及影响因素大的问题；本发明还确定了不同保鲜剂以及保鲜衬底物对孢子萌芽的影响以及研究了喷药、浸药以及含药方式对离体叶段进行杀菌剂处理后对条锈菌的抑制率的影响，从而确定最优选的方案，具有重复性高和潜在的社会经济意义。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	重庆;50
申请人：	西南大学
发明人：	毕朝位;彭复蓉;杨宇衡;余洋
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-21T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910424597.5
公开号：	CN110146668A
代理机构：	北京同恒源知识产权代理有限公司
代理人：	赵荣之
分类号：	G01N33/15(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	400715 重庆市北碚区天生路2号
主权项：	1.一种测定杀菌剂对小麦条锈菌毒力的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： (1)接种培养：将5～10μg/mL的小麦条锈菌孢子悬液接种到小麦幼苗上，于黑暗中保湿处理后取出，在温室中培养至出现病斑后备用； (2)制备保鲜培养基：将保鲜剂和杀菌剂加入到水琼脂中混合均匀，倒入培养皿中，再覆盖滤纸制备得到含药的保鲜培养基； (3)离体叶段药剂处理：选取步骤(1)中出现病斑的小麦幼苗，将长势相同的不同盆中的带明显病斑的中间段作为离体叶段，置于步骤(2)中所述含药的保鲜培养基中的滤纸上，将所述离体叶段的两端固定，再置于恒温箱中培养； (4)检测：利用photoshop测量孢子堆占比，计算防治效果和EC50。 2.根据权利要求1所述一种测定杀菌剂对小麦条锈菌毒力的方法，其特征在于，步骤(1)中所述小麦条锈菌孢子悬液的配制方法为：将小麦条锈菌孢子粉加入到0.1％的吐温20中，继续震荡至孢子粉充分分散，即可制备得到孢子悬液。 3.根据权利要求1所述一种测定杀菌剂对小麦条锈菌毒力的方法，其特征在于，步骤(1)中所述幼苗为1心1叶期的小麦幼苗。 4.根据权利要求1所述一种测定杀菌剂对小麦条锈菌毒力的方法，其特征在于，步骤(1)中所述保湿处理的时间为24h，所述温室中培养的条件为17～20℃、光照16h/d。 5.根据权利要求1所述一种测定杀菌剂对小麦条锈菌毒力的方法，其特征在于，步骤(1)中所述接种时采用的工具为喷笔，所述喷笔在接种时的压力设置为0～0.4bar，所述接种时按照每盆小麦幼苗2mL悬液的量进行接种。 6.根据权利要求1所述一种测定杀菌剂对小麦条锈菌毒力的方法，其特征在于，步骤(2)中所述保鲜剂包含赤霉素、6-苄氨基腺嘌呤或者苯并咪唑中的任意一种。 7.根据权利要求6所述一种测定杀菌剂对小麦条锈菌毒力的方法，其特征在于，所述赤霉素与水琼脂的质量体积比为10～30:1，所述6-苄氨基腺嘌呤与水琼脂的质量体积比为25～100:1，所述苯并咪唑与水琼脂的质量体积比为50～100:1，所述质量体积的单位为μg/mL。 8.根据权利要求7所述一种测定杀菌剂对小麦条锈菌毒力的方法，其特征在于，步骤(3)中所述杀菌剂为三唑酮，所述三唑酮与水琼脂之比为0.03～21.87:1，μg:mL。 9.根据权利要求1所述一种测定杀菌剂对小麦条锈菌毒力的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： (1)接种培养：将小麦条锈菌孢子粉加入到0.1％的吐温20中，震荡后加入清水，继续震荡至孢子粉充分分散，即可制备得到孢子悬液，所述孢子悬液中所述孢子粉的质量体积浓度为5～10μg/mL； (2)制备保鲜培养基：将6-苄氨基腺嘌呤和三唑酮加入到0.5％的水琼脂中混合均匀，倒入培养皿中，所述6-苄氨基腺嘌呤、三唑酮和水琼脂的质量体积比为75:0.03～21.87:1，μg:μg:mL； (3)离体叶段药剂处理：首先将9cm的圆形滤纸沿直径剪成2.5cm、4.0cm、2.5cm的三段，将中间4cm的滤纸条铺加到步骤(2)中的培养皿中；其次取步骤(1)中出现病斑的小麦幼苗盆栽，选取长势相同的同一高度的不同盆的小麦，剪取中间5cm的带有明显病斑的作为离体叶段，平行铺在4cm的滤纸上，用剩下的2.5cm滤纸将叶段两端固定并使之紧贴于培养基表面，使每个培养皿中含有来自不同盆的5个叶段，再将培养皿置于12℃恒温培养箱中光照培养18h形成测试组； (4)对照组：以不加杀菌剂、其它条件与测试组相同的培养皿作为对照组； (5)检测：用Photoshop软件进行病斑占比像素分析，先记录测试组与对照组的离体叶段的总像素，再记录离体叶段上孢子堆面积的总像素；用Excel计算出孢子堆面积的总像素的平均值以及孢子堆面积占比。
所属类别：	发明专利