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原文传递一种检测鱼肉中抗氧化剂的方法

专利名称：	一种检测鱼肉中抗氧化剂的方法
摘要：	本发明公开了一种检测鱼肉中抗氧化剂的方法，涉及食品中污染物检测方法，针对鱼肉中苯胺类抗氧化剂的检测方法进行开发，通过萃取净化仪器分析等过程，检测鱼肉中苯胺类抗氧化剂的浓度，本发明提供的方法通过以下手段实现：制作抗氧化剂标准曲线；制备待测样品液：待测鱼肉样品经预处理、萃取、净化及进一步净化，得到待测样品液；使用气相色谱‑串联三重四级杆质谱联用(GC‑EI‑MS/MS)对待测样品液进行检测分析，计算得到各成分在待测鱼肉样品中的含量百分比。上述方法检出限低，回收率达到标准，可用于实际鱼肉中抗氧化剂定性及定量检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	黑龙江;23
申请人：	哈尔滨学院
发明人：	孟博;贾珊珊;张子峰;李一凡
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-08T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910610811.6
公开号：	CN110220997A
代理机构：	哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司
代理人：	田鸿儒
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	150080 黑龙江省哈尔滨市南岗区中兴大道109号
主权项：	1.一种检测鱼肉中抗氧化剂的方法，其特征在于：包括以下步骤： (1)制作标准曲线：分别配置每种抗氧化剂标准品的梯度浓度标准溶液，分别使用气相色谱-串联三重四级杆质谱联用(GC-EI-MS/MS)检测分析，计算各成分的面积，以各成分峰面积对各成分在标准溶液中的实际浓度进行线性回归并得到标准曲线； (2)制备待测样品液：待测鱼肉样品经预处理、萃取、净化及进一步净化，得到待测样品液； (3)使用气相色谱-串联三重四级杆质谱联用(GC-EI-MS/MS)对步骤(2)所得待测样品液进行检测分析，计算得到各成分峰面积，将各成分的峰面积分别代入各自的标准曲线方程，得到各成分在待测样品液中的实际浓度，进一步计算得到各成分在待测鱼肉样品中的实际含量、各成分在待测鱼肉样品中的含量百分比；以上步骤，按照步骤(1)、(2)、(3)的顺序进行，或按照步骤(2)、(1)、(3)的顺序进行。 2.根据权利要求1所述的检测鱼肉中抗氧化剂的方法，其特征在于：所述步骤(2)还包括以下具体步骤： 1)鱼肉预处理：取待测鱼肉样品，加入无水硫酸钠混合，研磨成细粉，加入内标混合均匀； 2)萃取：预处理后的鱼肉样品加入溶剂萃取，萃取液浓缩为粗样品液； 3)净化：粗样品液经凝胶色谱柱净化、旋转蒸发、氮吹仪浓缩后，加入异辛烷，得初步净化样品液； 4)进一步净化：初步净化样品液上样至硅胶和无水硫酸钠装填的净化柱，淋洗后洗脱，加入溶剂，浓缩得到待测样品液。 3.根据权利要求2所述的检测鱼肉中抗氧化剂的方法，其特征在于：步骤1)所述待测鱼肉样品与无水硫酸钠的质量比为1:4；所述内标为13C12-DPA，内标加入质量与待测鱼肉样品的质量比为0.1×10-6:5；最后混合均匀后静置平衡20min。 4.根据权利要求2所述的检测鱼肉中抗氧化剂的方法，其特征在于：步骤2)所述萃取具体为：加入溶剂，震荡，收集萃取液，重复以上步骤2次，合并三次萃取液，加入异辛烷，浓缩。 5.根据权利要求4所述的检测鱼肉中抗氧化剂的方法，其特征在于：步骤2)中所用溶剂为丙酮/正己烷混合溶剂，混合溶剂中丙酮/正己烷体积比为1:1；每次萃取加入的溶剂体积与待测鱼肉样品质量的比例为5mL:1g；每次震荡时间为30min；经震荡萃取后，使用离心机离心15分钟，转速为3000r/min，收集上层，之后重复萃取步骤2次，合并三次萃取收集的上层，为萃取液；加入异辛烷的体积为萃取过程中每次加入溶剂体积的1/5；所述浓缩，浓缩后的体积为1-2mL。 6.根据权利要求2所述的检测鱼肉中抗氧化剂的方法，其特征在于：步骤3)所述凝胶色谱柱净化具体为：粗样品液上样至凝胶色谱柱(GPC，30mm×10mm，Biobead S-X3)，用乙酸乙酯与环己烷体积比为1:1的混合液洗脱目标污染物并收集洗脱液；所述加入异辛烷的体积为1-2mL。 7.根据权利要求2所述的检测鱼肉中抗氧化剂的方法，其特征在于：步骤4)所述净化柱，装填柱料为5％灭活的硅胶与无水硫酸钠，硅胶与无水硫酸钠的质量比为5:1，净化柱中无水硫酸钠装填量为2g；所述淋洗，使用正己烷，使用体积与净化柱中硅胶的质量的比例为25mL/10g；所述洗脱，使用乙酸乙酯和正己烷体积比为1:1的混合液，使用体积与净化柱中硅胶的质量的比例为45mL/10g；所述加入的溶剂为异辛烷，加入的体积为5mL；所述浓缩，具体为：先在32℃条件下旋转蒸发至约2mL，转移至离心管中，氮吹浓缩至1mL。 8.根据权利要求1所述的检测鱼肉中抗氧化剂的方法，其特征在于：步骤(1)具体为：制作标准曲线：分别配置每种抗氧化剂标准品的梯度浓度标准溶液，计算出各抗氧化剂标准品在其标准溶液中的实际浓度，使用气相色谱-串联三重四级杆质谱联用(GC-EI-MS/MS)对标准溶液进行检测分析，根据质谱结果及各抗氧化剂标准品的保留时间对检出峰进行定性，计算各成分的峰面积，取7～11个检测点，以各抗氧化剂标准品峰面积对在其标准溶液中的实际浓度进行线性回归并得到标准曲线。 9.根据权利要求1所述的检测鱼肉中抗氧化剂的方法，其特征在于：所述抗氧化剂标准品为苯乙烯基化-N-苯基苯胺635(BNS,benzenamine,n-phenyl-,styrenated,CAS:68442-68-2；包括3种苯乙烯胺(S-DPA)异构体和2种二苯乙烯二苯胺(DS-DPA)同分异构体)、N-苯基苯胺与2,4,4-三甲基戊烯 PS-30(BNT,benzenamine,n-phenyl-,reaction products with 2,4,4-trimethypentene,CAS#:68411-46-1；包括叔丁基/叔辛基二苯胺(C4/C8-DPA)、叔丁基-二苯胺(C4-DPA)、叔辛基二苯胺(C8-DPA)、二异叔丁基二苯胺(C4/C4-DPA)、二异辛基二苯胺(C8/C8-DPA))、2,2'-二萘胺(D2NA，di-2-Dinaphthylamine，CAS#：532-18-3)、二苯胺(DPA，Diphenylamine，CAS#：122-39-4)、亚氨基芪(DBA，5h-dibenz[b,f]azepine，CAS#：256-96-2)、亚胺基二苄(IDB，Iminodibenzyl，CAS#：494-19-9)、二苯甲胺(DPMA，Diphenylmethylamine，CAS#：552-82-9)、1,1'-二萘胺(D1NA，di-1-Dinaphthylamin，CAS#：737-89-3)、N-苯基-1-萘胺(PNA，N-Pheny1-1-naphthylamine，CAS#:90-30-2)、N-苯基邻苯二胺(ADPA，2-Aminodiphenylamine，CAS#:534-85-0)、二苯胺(DPA，Diphenylamine，CAS#：122-39-4)、二仲丁基对苯二胺(DBPDA，N,N'-di-sec-butyl-1,4-phenylenediamine，CAS#:101-96-2)或N-(1,3-二甲基)丁基-N'-苯基对苯二胺(DMBPD，N-(1,3-dimethylbutyl)-N'-phenyl-1,4-phenylenediamine，CAS#:793-24-8)。 10.根据权利要求1所述的检测鱼肉中抗氧化剂的方法，其特征在于：上述步骤(3)具体为：待测样品液检测：使用气相色谱-串联三重四级杆质谱联用(GC-EI-MS/MS)对步骤(2)所得待测样品液进行检测分析，根据质谱结果及各成分保留时间对检出峰进行定性，然后计算得到各成分峰面积，将各成分的峰面积分别代入各自的标准曲线方程，得到各成分在待测样品液中的实际浓度，根据质量＝浓度*体积，计算得到各成分在待测样品液中的实际含量，即各成分在步骤(2)中的待测鱼肉样品的实际含量，进一步计算得到各成分在待测鱼肉样品中的含量百分比。 11.根据权利要求1所述的检测鱼肉中抗氧化剂的方法，其特征在于：所述气相色谱-串联三重四级杆质谱联用(GC-EI-MS/MS)，其中气相色谱使用Agilent-7890A气相色谱系统，三重四级杆质谱使用安捷伦7000A三重四极杆质谱仪；气相色谱柱为30-m DB-5 MS熔融石英毛细管柱，内径0.25mm，内膜0.25μm(J&W Scientific,CA,USA)；进样口温度为300℃，采用1μL进样不分流模式；载气为氦气和氮气，纯度>99.99％；氦气流量为2.25mL/min，氮气为1.5mL/min；隔垫吹扫流速为3mL/min；3min后，载气流速为20mL/min，0.8min前，注射脉冲压力为40psi；在1.2min，设定吹扫气流流速为50mL/min；柱温升温程序为：80℃保持1min后，以20℃/min的速度升到220℃，然后以5℃/min的速度升到250℃，并保持1min；然后以20℃/min的速度升到300℃后，保持5min，升到305℃后保持5min；电子能量为70eV，离子源温度为300℃，质谱MS1&2温度为150℃；质谱采用的是扫描式多反应监测(multiple reactionmonitoring，MRM)模式。
所属类别：	发明专利