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原文传递基于NiFe2O4纳米管的异鲁米诺全功能探针的双模式电致化学发光-温度免疫传感器

专利名称：	基于NiFe2O4纳米管的异鲁米诺全功能探针的双模式电致化学发光-温度免疫传感器
摘要：	本发明公开一种基于NiFe2O4纳米管的异鲁米诺全功能探针的双模式电致化学发光‑温度免疫传感器，特点是黑磷量子点（BPQDs）不仅具有良好的电催化性能，能够促进析氧反应（OER）过程，增加溶解氧的浓度，增强发光强度；而且具有优异的光热转换效率，可作为光热探针，在808 nm激光照射下，有效地将检测信号转换为热，实现对目标物的定量分析。此外，NiFe2O4纳米管（NiFe2O4 NTs）作为探针基底，极大的增加了发光试剂N‑(4‑氨丁基)‑N‑乙基异鲁米诺（ABEI）和BPQDs的负载量，进一步提高了电致化学发光和光热信号。本发明设计的双模式免疫分析方法灵敏度高，操作简单，准确度高，将其用于卵巢癌标记物，脂多糖刺激脂蛋白受体的检测，取得了良好的检测结果。在早期卵巢癌诊断和监控方面具有较为重要的价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	福建师范大学
发明人：	戴宏;李佳宁;房丹丹;高利红;张书培;林燕语
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-06T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910606639.7
公开号：	CN110220957A
代理机构：	福州智理专利代理有限公司
代理人：	王义星
分类号：	G01N27/30(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	350108 福建省福州市闽侯县上街镇学园路福建师大旗山校区福建师大科研处
主权项：	1.一种基于NiFe2O4纳米管的异鲁米诺全功能探针的双模式电致化学发光-温度免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）玻碳电极（GCE）首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依次用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；（2）将4 mg的扇形金红石TiO2介晶（SUT）分散于1 mL 浓度为10 mM的氨基离子液体（ILs）中，超声混合均匀，得到SUT-ILs复合物溶液，滴加3 uL 所获得的SUT-ILs复合物溶液于干净的玻碳电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，制得UST-ILs修饰电极；（3）滴加3 uL 1 wt.% 戊二醛于步骤（2）所制得的电极界面，室温下反应40 min；（4）滴加3 uL 浓度为100 ng/mL 的脂解激活脂蛋白受体单克隆抗体（Ab1）于步骤（3）制得的修饰电极介面，室温下孵育50 min，用去离子水洗去物理吸附，制得Ab1/UST-ILs修饰电极；（5）滴加 3 uL 1.0 wt.%的BSA溶液到步骤（4）修饰电极界面，室温下孵育40 min，封闭电极表面上非特异性活性位点，用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附，储存在4 °C冰箱中备用；（6）取100 uL浓度为1.0×10-2 M的 N-(4-氨丁基)-N-乙基异鲁米诺（ABEI）和100 uL浓度为0.1 mg/mL的黑磷量子点（BPQDs），同时加入100 uL 浓度为3 mg/mL的NiFe2O4 纳米管溶液中，室温下振荡5 h,使ABEI和BPQDs吸附到NiFe2O4 纳米管（NiFe2O4 NTs）表面，离心，洗涤,再分散制得NiFe2O4 NTs@ABEI@BPQDs复合物溶液；随后，在1 wt.% 的戊二醛（GLD）的辅助作用下加入100 uL浓度为100 μg/mL的HRP标记的山羊抗兔IgG (Ab2)，室温下震荡50 min, 离心，洗涤，再分散制得NiFe2O4 NTs@ABEI@BPQDs-Ab2复合物溶液, 然后向上述溶液中加入1wt.%的BSA溶液封闭非特异性吸附位点，保存在4 °C冰箱中备用；（7）将步骤（5）所制得的修饰电极浸入到不同浓度的脂解激活脂蛋白受体 (LSR）标准溶液中并在室温下孵育40 min，用去离子水冲洗电极表面，制得LSR/Ab1/UST-ILs修饰电极，并保存在4 °C冰箱中备用； (8) 取3 uL步骤（6）制得的Ab2-NiFe2O4 NTs@ABEI@BPQDs-Ab2复合物溶液于步骤（7）所制得的修饰电极界面，室温下孵育50 min, 用去离子水冲洗电极表面,制得NiFe2O4 NTs@ABEI@BPQDs-Ab2/ LSR/Ab1/UST-ILs修饰电极，并保存在4 °C冰箱中备用。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的NiFe2O4 纳米管由下述方法制备的：将4.8 g氯化铁，2.56 g 硝酸镍和4.4 g 对苯二甲酸加入到264 mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）溶液中震荡20 min; 随后，将56 mL 0.4 mol/L氢氧化钠溶液加入到上述混合液，待混合均匀后转至200 mL反应釜中，在124 °C 下加热48 h; 冷却至室温后，用超纯水和乙醇离心、洗涤数次，最后，将所得产物在450 °C 下以1 °C min-1 煅烧8 h,自然冷却，得到产物NiFe2O4 纳米管。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的黑磷量子点（BPQDs）由下述方法制备的：将5 mg的黑磷晶体粉末加入到含1 mL N-甲基吡啶烷酮（NMP）的研钵中，充分研磨后，将混合物转移到含3 mL NMP的玻璃瓶中；密封仔细，在100 W的功率下，在冰浴中超声8h, 然后在7000 rpm离心20 min, 再在10，000 rpm离心20 min得到BPQDs。 4.权利要求1-3任一所述的方法制备的一种基于NiFe2O4 NTs@ABEI@BPQDs探针的双模式电致化学发光/光热免疫传感器。 5.权利要求4所述的一种基于NiFe2O4 NTs@ABEI@BPQDs 探针的双模式电致化学发光/光热免疫传感器；其特征在于，用于脂解激活脂蛋白受体（LSR）检测，检测步骤如下：（1）使用电化学工作站采用三电极体系进行测定，以权利要求4所述的基于NiFe2O4NTs@ABEI@BPQDs 探针的双模式电致化学发光/光热免疫传感器为工作电极，Ag/AgCl为参比电极，铂丝电极为辅助电极，在0.1 mol/mL pH 8.0的 PBS缓冲溶液中进行测试；（2）采用电位范围-0.6 ~ 0.9 V，扫描速率0.15 V/s电位窗口，电致化学发光设备光电倍增管800 V对不同浓度的脂解激活脂蛋白受体（LSR）标准溶液进行检测，通过电致化学发光设备采集 0.5 V的ECL信号强度，通过ECL信号强度与脂解激活脂蛋白受体（LSR）标准溶液浓度之间的关系，绘制工作曲线；（3）待测样品溶液代替脂解激活脂蛋白受体（LSR）标准溶液进行检测，检测的结果可通过工作曲线查得。 6.权利要求4所述的一种基于NiFe2O4 NTs@ABEI@BPQDs 探针的双模式电致化学发光/光热免疫传感器；其特征在于，用于脂解激活脂蛋白受体（LSR）检测，检测步骤如下：使用电化学工作站采用三电极体系进行测定，以权利要求4所述的基于NiFe2O4 NTs@ABEI@BPQDs 探针的双模式电致化学发光/光热免疫传感器为工作电极，Ag/AgCl为参比电极，铂丝电极为辅助电极，温度计为信号读出器，通过温度与脂解激活脂蛋白受体（LSR）标准溶液浓度之间的关系，绘制工作曲线, 检测LSR。
所属类别：	发明专利