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原文传递一种人源诺如病毒免疫胶体金试剂盒及细胞株

专利名称：	一种人源诺如病毒免疫胶体金试剂盒及细胞株
摘要：	本发明公开了一种人源诺如病毒免疫胶体金试剂盒，涉及分子生物学与免疫学领域，包括固相载体、检测抗体和样品处理液，其中固相载体包括样品垫、胶体金结合垫、具有检测线和质控线的承载膜、吸收垫及底板，胶体金结合垫包括结合垫本体和涂覆于结合垫本体上的胶体金标记抗体涂层；本发明还公开了相应的特异性细胞株。本发明通过人源诺如病毒S区衣壳蛋白抗体的制备，解决了现有技术制备工艺复杂、蛋白免疫学活性损失达、特异性差等问题，获得的单克隆抗体构建了人源诺如病毒的免疫胶体金检测体系，具有快速、简便、高效、检测谱广且更加安全的优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海交通大学
发明人：	王大鹏
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910555785.1
公开号：	CN110221080A
代理机构：	上海旭诚知识产权代理有限公司
代理人：	郑立
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	200240 上海市闵行区东川路800号
主权项：	1.一种人源诺如病毒免疫胶体金试剂盒，其特征在于，包括固相载体、检测抗体和样品处理液，其中所述固相载体包括样品垫、胶体金结合垫、具有检测线和质控线的承载膜、吸收垫及底板，所述胶体金结合垫包括结合垫本体和涂覆于所述结合垫本体上的胶体金标记抗体涂层，所述检测线为能够与所述胶体金标记抗体特异性结合的配对抗体形成的涂层，所述检测线位于所述承载膜的靠近所述胶体金结合垫一端，所述质控线位于所述承载膜的靠近所述吸收垫一端。 2.如权利要求1所述的一种人源诺如病毒免疫胶体金试剂盒，其特征在于，所述胶体金结合垫和所述检测线使用的抗体为人源诺如病毒S(GI/GII)区衣壳蛋白的单克隆抗体；所述质控线为羊抗鼠二抗形成的涂层。 3.如权利要求1所述的一种人源诺如病毒免疫胶体金试剂盒，其特征在于，所述承载膜采用NC膜，所述底板采用PVC材料。 4.如权利要求1所述的一种人源诺如病毒免疫胶体金试剂盒，其特征在于，所述样品处理液包括PBS溶液和DTT溶液，其中所述PBS溶液的pH值为9，所述DTT溶液的浓度为10.0％(w/v)。 5.如权利要求1所述的一种人源诺如病毒免疫胶体金试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中所述固相载体和所述检测抗体的搭配组合可采用以下方式：(1)纳米金颗粒标记的所述单克隆抗体与同种的所述单克隆抗体搭配；(2)纳米金颗粒标记的所述单克隆抗体与对应的所述单克隆抗体中具有不同抗原表位的单克隆抗体搭配。 6.如权利要求1所述的一种人源诺如病毒免疫胶体金试剂盒，其特征在于，所述人源诺如病毒S(GI/GII)区衣壳蛋白的单克隆抗体通过以下步骤制备：步骤一、扩增所述人源诺如病毒S(GI/GII)区衣壳蛋白编码区基因，通过限制性内切酶在酶切位点酶切将其插入原核表达载体pET-28a，得到重组表达质粒pET28a-S(GI/GII)，其中所述酶切位点为上游EcoR I，下游Xho I；步骤二、将所述步骤一中得到的所述重组表达质粒pET28a-S(GI/GII)转化至大肠杆菌BL21，加入诱导剂诱导所述S(GI/GII)区衣壳蛋白的表达，得到诱导后的重组细菌；步骤三、收集并破碎诱导后的所述重组细菌免疫实验动物；免疫后，适时融合所述免疫实验动物的脾细胞与骨髓瘤，以差异性ELISA法筛选杂交瘤细胞株，获得只分泌所述S(GI/GII)区衣壳蛋白的特异性抗体的阳性细胞株，所述阳性细胞株通过普通培养法得到含有只针对所述S(GI/GII)区衣壳蛋白的单克隆抗体细胞上清液，或者将所述细胞株注入所述免疫实验动物腹腔内获得含有只针对所述S(GI/GII)区衣壳蛋白的所述单克隆抗体的腹水；步骤四、将所述步骤三中得到的含有所述单克隆抗体的细胞培养上清液或腹水进行纯化，得到纯化的所述人源诺如病毒S(GI/GII)区衣壳蛋白的单克隆抗体。 7.如权利要求6所述的一种人源诺如病毒免疫胶体金试剂盒，其特征在于，所述步骤一中还需引入上游扩增引物P1和下游扩增引物P2，针对所述人源诺如病毒S(GⅠ)区衣壳蛋白的所述上游扩增引物和下游扩增引物的核酸序列分别为5’GAATTCATGATGATGGCGTCTAAG 3’和5’CTCGAGCTCCACCGTAGGAGGGAC 3’；针对所述人源诺如病毒S(GⅡ)区衣壳蛋白的所述上游扩增引物和下游扩增引物的核酸序列分别为5’GAATTCATGAAGATGGCGTCGAGTG3’和5’CTCGAGCTCAACTGTGGGTGGCAC 3’。 8.如权利要求6所述的一种人源诺如病毒免疫胶体金试剂盒，其特征在于，所述差异性ELISA法筛选为含所述重组表达质粒pET28a-S(GI/GII)和空的所述原核表达载体pET-28a的所述诱导后的重组细菌的裂解物包被固相载体，分别与待筛选的单克隆抗体细胞株所分泌的抗体进行反应，只与含所述重组表达质粒pET28a-S(GI/GII)的所述诱导后的重组细菌的裂解物反应，而不与空的所述原核表达载体pET-28a的所述诱导后的重组细菌的裂解物反应的细胞株定为阳性，从而获得分泌针对不同基因型诺如病毒S区衣壳蛋白抗体的阳性细胞株。 9.一种只分泌针对人源诺如病毒S(GI/GII)区衣壳蛋白抗体的阳性细胞株，其特征在于，所述阳性细胞株为一种杂交瘤细胞株，保藏编号为CCTCC C2018185。 10.一种只分泌针对人源诺如病毒S(GI/GII)区衣壳蛋白抗体的阳性细胞株，其特征在于，所述阳性细胞株为一种杂交瘤细胞株，保藏编号为CCTCC C201938。
所属类别：	发明专利