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原文传递一种诺如病毒GI型GII型联合检测试剂及其制备方法

专利名称：	一种诺如病毒GI型GII型联合检测试剂及其制备方法
摘要：	本发明公开了一种诺如病毒GI型GII型联合检测试剂及其制备方法，包括PVC底板，所述PVC底板顶部的左侧粘合连接有样品垫，所述PVC底板顶部的左侧并位于样品垫的右侧粘合连接有胶体金标记垫，所述胶体金标记垫顶部的左侧与样品垫底部的右侧粘合连接，所述PVC底板顶部的中心处粘合连接有NC膜。本发明同时提供一种工艺简单、重复性好、成品结构稳定，使用性能佳的诺如病毒GI型/GII型联合检测试剂的其制备方法，由于能同时检查两种基因型(GI型/GII型)的诺如病毒，可以大大提高检出率，并且能对其进行分型，非常适合医院及防控单位的要求，来解决临床散发病例或疫情爆发时的诺如病毒感染患者的快速筛查和诊断。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	珠海市医友生物科技有限公司
发明人：	郭勇华;刘现杰
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-06T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-15T00:00:00+0800
申请号：	CN201910720354.6
公开号：	CN110456041A
代理机构：	北京华际知识产权代理有限公司
代理人：	范登峰
分类号：	G01N33/53(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	519000广东省珠海市高新区唐家湾镇金鼎金峰西路24号4栋三层4301
主权项：	1.一种诺如病毒GI型GII型联合检测装置，包括PVC底板(1)，其特征在于：所述PVC底板(1)顶部的左侧粘合连接有样品垫(2)，所述PVC底板(1)顶部的左侧并位于样品垫(2)的右侧粘合连接有胶体金标记垫(3)，所述胶体金标记垫(3)顶部的左侧与样品垫(2)底部的右侧粘合连接，所述PVC底板(1)顶部的中心处粘合连接有NC膜(4)，所述NC膜(4)顶部的左侧与胶体金标记垫(3)底部的右侧粘合连接，所述NC膜(4)的顶部从左至右依次设置有GI检测线(5)、GII检测线(6)和质控线(7)，所述GII检测线(6)的左侧位于GI检测线(5)的右侧，所述质控线(7)的左侧位于GII检测线(6)的右侧，所述PVC底板(1)顶部的右侧粘合连接有吸水垫(8)，所述吸水垫(8)底部的左侧与NC膜(4)顶部的右侧粘合连接。 2.根据权利要求1所述的一种诺如病毒GI型GII型联合检测装置，其特征在于：所述胶体金标记垫(3)上标记有鼠抗诺如病毒GI型单克隆抗体1和鼠抗诺如病毒GII型单克隆抗体2。 3.根据权利要求1所述的一种诺如病毒GI型GII型联合检测装置，其特征在于：所述GI检测线(5)和GII检测线(6)的左侧均靠近胶体金标记垫(3)的右侧，所述质控线(7)的右侧靠近吸水垫(8)的左侧。 4.根据权利要求1所述的一种诺如病毒GI型GII型联合检测装置，其特征在于：所述NC膜(4)的材质为硝酸纤维素膜，所述胶体金标记垫(3)的材质为聚酯膜，所述样品垫(2)的材质为聚酯膜或玻璃纤维素膜。 5.一种诺如病毒GI型GII型联合检测试剂制备方法，其特征在于：其制备方法包括以下步骤： A、制备样品垫(2)：将所述样品垫(2)置于样品垫(2)处理液中浸泡，然后将含有样品垫(2)处理液的所述样品垫(2)置于温度为18—24℃、相对湿度小于40％的环境中烘干16—24h，备用；其中，样品垫(2)处理液为含0.5％吐温-20、1％BSA的pH为8.0的1mol/L磷酸盐缓冲液或Tris—HCl缓冲液； B、制备胶体金标记垫(3)：a、胶体金溶液制备：用量筒量取980mL工艺用水到烧瓶中，加入制备量1％氯化金溶液，边搅拌，边加热至沸腾，一边搅拌，迅速加入制备量1％柠檬酸三钠溶液，颜色变成橙红色后，继续煮沸15分钟，关闭搅拌器，让胶体金溶液自然冷却，用工艺用水将胶体金溶液定容至1000mL，b、抗体标记及胶体金标记垫(3)制备：最佳pH值的确定：取320ml上述胶体金溶液，取用0.1M的碳酸钾溶液调整胶体金溶液的pH值至合适pH值，将溶液放到磁力搅拌器上，调整转速为250rpm，搅拌状态下，加入所需量鼠抗诺如病毒GI型单克隆抗体1和鼠抗诺如病毒GII型单克隆抗体2，这两种抗体在此时溶液中的浓度控制在8—10ug/ml，静止15分钟后加入10％BSA，使BSA终浓度为0.1％，和0.32ml的1％GEG20000，继续搅拌10分钟，离心：将标记好的溶液转移到离心管中，天平上调整平衡，2—8℃，10000rpm，离心30分钟，心吸出上清，收集沉淀，用金标结合物稀释液定容到原胶体金溶液体积的10％，涂布：取聚酯无纺布，设定涂布量为6—8ul/cm，干燥温度37℃，相对湿度≤40％，转动速度1.5米/分，将涂布好的胶体金转移到干燥间，干燥温度为37℃，干燥湿度为≤40％，时间16—24小时，胶体金垫干燥后，铝箔袋封存备用； C、制备检测垫：按照配方要求配置好质控线(7)C和GI检测线(5)与GII检测线(6)的抗体溶液，取NC膜(4)(规格宽度25mm)，按照距离间隔一次性划出所述诺如病毒GI型GI检测线(5)、所述诺如病毒GII型GII检测线(6)和所述质控线(7)C线，所述诺如病毒GI型GI检测线(5)包被有鼠抗诺如病毒GI型单克隆抗体3，所述诺如病毒GII型GII检测线(6)包被有鼠抗诺如病毒GII型单克隆抗体4，质控线(7)(C线)处包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体，距离间隔设定如下：GI检测线(5)离NC膜(4)的底端距离为7mm，GII检测线(6)离NC膜(4)的底端距离为12mm，质控线(7)离NC膜(4)的底端距离为17mm，设定干燥温度为37℃，相对湿度≤40％的环境下干燥，时间16—24小时，包被好的NC膜(4)经干燥塔干燥后，卷好备用； D、贴板及切割：将所述样品垫(2)、所述标记垫、所述检测垫、所述吸水垫(8)顺序搭接所述PVC底板(1)上，并按照规格要求切割成宽度3.3mm(条型)和4.0mm(卡型)，检查内包间温湿度，确保温度是18—24℃，湿度：≤40％才能开始工作，在台面上展开PVC板，两端粘在操作台上，撕掉中间部分宽度为25mm的离层纸，将划线NC膜(4)对准直线贴在撕开离层纸的地方，再撕开PVC板下边的保护纸，将胶体金黏贴在PVC板上，让胶体金的上边缘与划线NC膜(4)的下边缘重叠1.0—2.0毫米，将样品垫(2)粘贴在胶体金的下方，让样品垫(2)的上边缘与胶体金的下边缘重叠1.0—2.0毫米，撕开PVC板上边的离层纸，将吸水纸直线黏贴到PVC板上，让吸水纸与划线NC膜(4)的上边缘重叠2毫米左右，贴透明胶带，让透明胶带完全覆盖胶体金垫，操作自动斩切机，按要求的宽度切割。
所属类别：	发明专利