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原文传递一种免疫活性肽的筛选方法

专利名称：	一种免疫活性肽的筛选方法
摘要：	本发明涉及一种免疫活性肽的筛选方法，所述筛选方法包括如下步骤：S1、通过水解酶水解至少一种含有免疫活性肽的蛋白质，获得免疫活性肽组成的肽库，所述肽库中的多肽通过质谱技术获得其肽序；S2、筛选出与MHC Ⅱ类分子有强结合的肽序；S3、合成S2中筛选出的肽序；S4、构建LPS诱导的细胞模型用于验证S3所合成的多肽的免疫活性。本发明可避免后续对肽序和结合位点的繁琐鉴定，直接获得与MHC Ⅱ类分子结合的多肽；且可以对多肽与MHC Ⅱ类分子结合的反应原性和免疫原性同时进行说明，使数据更完善，获得多肽的过程更快捷，效率更高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖南;43
申请人：	长沙理工大学
发明人：	程云辉;黄璐;许宙;陈茂龙;文李;银波;盛灿梅;毛田米
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910355966.X
公开号：	CN110161253A
代理机构：	北京旭路知识产权代理有限公司
代理人：	姚自奇;莫舒颖
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	410114 湖南省长沙市(雨花区)万家丽南路2段960号
主权项：	1.一种免疫活性肽的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括如下步骤： S1、通过水解酶水解至少一种含有免疫活性肽的蛋白质，获得免疫活性肽组成的肽库，所述肽库中的多肽通过质谱技术获得其肽序； S2、筛选出与MHCⅡ类分子有强结合的肽序； S3、合成S2中筛选出的肽序； S4、构建LPS诱导的细胞模型用于验证S3所合成的多肽的免疫活性。 2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述蛋白质选自植物来源的蛋白质和动物来源的食源性蛋白质中的一种或多种组合。 3.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，所述水解酶选自胃蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶和碱性蛋白酶中的一种或多种组合。 4.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述与MHCⅡ类分子结合的表位选自下组：DRB10101、DRB10301、DRB10401、DRB10701、DRB11101、DRB11501、H-2-IAb和H-2-IAd。 5.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述S4步骤包括：建立LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7的细胞模型，以NO为初级指标，并通过对细胞炎症因子TNF-α、iNOS、IL-6和IL-1β在蛋白水平和mRNA水平的考察以此验证合成多肽的免疫活性。 6.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述S2步骤包括：筛选出与MHCⅡ类分子中多个表位强结合的肽。 7.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，所述多个为3以上。 8.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，所述S2中与MHCⅡ类分子有强结合的肽序选自：SEQ ID NO.1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37。 9.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，在S2步骤中，与MHCⅡ类分子强结合的％Rank值设定为2，弱结合的％Rank值设定为10。 10.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤S4中，在对NO指标的考察中，合成的多肽在0～100μg/mL范围内，至少存在某一浓度与炎症组相比具有显著性差异，即p＜0.05；在对细胞炎症因子的考察中，合成的多肽在0～25μg/mL范围内，至少存在某一浓度与炎症组相比具有显著性差异，即p＜0.05。
所属类别：	发明专利