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原文传递检测抗CCP抗体的均相免疫检测试剂盒及其应用

专利名称：	检测抗CCP抗体的均相免疫检测试剂盒及其应用
摘要：	本发明涉及一种抗‑CCP抗体均相免疫检测试剂盒。该试剂盒采用高灵敏度和特异性瓜氨酸化牛血清白蛋白作为抗原，结合能够区分出免疫复合物状态下的抗体和非特异性抗体、未结合抗原的游离的特异性抗体的抗免疫复合物抗体和光激化学发光技术制成。该试剂盒在检测过程中不受非特异性抗体的干扰而可以省略传统间接法中需要洗涤的过程。该试剂盒特异性高、灵敏度好、线性范围宽、反应速度快、操作简便，并可实现全自动化高通量测试。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京科美生物技术有限公司
发明人：	饶星;廖智星;刘宇卉;李临;其他发明人请求不公开姓名
专利状态：	有效
申请日期：	2018-02-11T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201810143149.3
公开号：	CN110161232A
代理机构：	北京聿宏知识产权代理有限公司
代理人：	吴大建;方莉
分类号：	G01N33/558(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100094 北京市海淀区永丰基地丰贤中路7号北科现代制造园孵化楼B座二层
主权项：	1.一种用于检测抗-CCP抗体的均相免疫检测试剂套装，其包括：组分a，其包含能够与抗-CCP抗体的抗原表位结合位点特异性结合的第一抗原；组分b，其包含抗免疫复合物抗体，所述抗免疫复合物抗体能够特异性识别和结合与第一抗原形成的第一免疫复合物中的抗-CCP抗体，不识别游离的、未结合抗原的抗-CCP抗体。 2.根据权利要求1所述的试剂套装，其特征在于，所述第一抗原或所述抗免疫复合物抗体与受体相结合，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测的化学发光信号。 3.根据权利要求2所述的试剂套装，其特征在于，所述受体包含烯烃化合物和金属螯合物，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述受体为填充有发光化合物和镧系元素的高分子微粒。 4.根据权利要求1-3中任意一项所述的试剂套装，其特征在于，所述试剂套装还包含组分c，其包含能够在激发状态产生单线态氧的供体；优选所述供体与特异性结合配对成员中的一员结合，而特异性结合配对成员中的另一员与所述第一抗原或所述抗免疫复合物抗体结合；进一步优选地，所述供体与链霉亲和素结合，相应地第一抗原或所述抗免疫复合物抗体与生物素结合。 5.根据权利要求4所述的试剂套装，其特征在于，所述供体为光活化的或化学活化的敏化剂，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述供体为填充有感光化合物的高分子微粒，在光激发下能够产生单线态氧。 6.根据权利要求1-5中任意一项所述的试剂套装，其特征在于，所述抗免疫复合物抗体通过识别表位与第一免疫复合物中的抗-CCP抗体结合，所述识别表位是构象表位和/或线性表位。 7.根据权利要求1-6中任意一项所述的试剂套装，其特征在于，所述抗免疫复合物抗体识别第一免疫复合物中抗-CCP抗体的恒定区部分。 8.根据权利要求1-7中任意一项所述的试剂套装，其特征在于，所述抗免疫复合物抗体不识别第一免疫复合物中抗-CCP抗体的轻链部分。 9.根据权利要求1-8中任意一项所述的试剂套装，其特征在于，所述抗免疫复合物抗体特异性识别第一免疫复合物中抗-CCP抗体的Fc段。 10.根据权利要求1-9中任意一项所述的试剂套装，其特征在于，所述抗免疫复合物抗体为多克隆抗体和/或单克隆抗体；优选地，所述抗免疫复合物抗体为单克隆抗体。 11.根据权利要求10所述的试剂套装，其特征在于，所述多克隆抗体的制备方法包括：用人免疫复合物对动物进行免疫，获取含有所述多克隆抗体的动物血清；所述动物血清经亲和层析纯化得到特异性识别人免疫复合物的多克隆抗体。 12.根据权利要求10所述的试剂套装，其特征在于，所述单克隆抗体的制备方法包括：将经人免疫复合物免疫后的小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后进行培养，对细胞培养上清液进行检测，保留阳性细胞株。 13.根据权利要求1-12中任意一项所述的试剂套装，其特征在于，所述第一抗原选自合成的含瓜氨酸的环型肽、含瓜氨酸的线型肽、由至少2个单一含瓜氨酸的肽段合成在一条肽链上形成的多肽、含有至少2个单一含瓜氨酸的肽段的瓜氨酸肽段混合物和瓜氨酸化蛋白。 14.根据权利要求13所述的试剂套装，其特征在于，所述第一抗原选自合成的含环瓜氨酸的环型肽、含瓜氨酸的线型肽、由至少2个单一含瓜氨酸的肽段合成在一条肽链上形成的多肽和含有至少2个单一含瓜氨酸的肽段的瓜氨酸肽段混合物。 15.根据权利要求14所述的试剂套装，其特征在于，所述第一抗原为由2-4个含瓜氨酸的肽段合成在一条肽链上形成的多肽或含有2-4个单一含瓜氨酸的肽段的瓜氨酸肽段混合物；优选所述含瓜氨酸的肽段选自SEQ ID No.1-4。 16.根据权利要求14或15所述的试剂套装，其特征在于，所述第一抗原通过中间体与受体相结合，所述中间体为亲水性高分子物质。 17.根据权利要求16所述的试剂套装，其特征在于，所述中间体为蛋白质，优选选自血蓝蛋白、卵清蛋白、牛血清白蛋白或牛甲状腺球蛋白。 18.根据权利要求16所述的试剂套装，其特征在于，所述中间体选自树枝状大分子、聚羧酸酯、聚巯基和聚乙二醇。 19.根据权利要求1-18中任意一项所述的试剂套装，其特征在于，所述受体及与之结合的第一抗原的总浓度为10-200μg/mL，优选20-150μg/mL，更优选25-100μg/mL；和/或，所述抗免疫复合物抗体及与之结合的特异性结合配对成员中的一员的总浓度为0.1-10μg/mL，优选0.5-5μg/mL，更优选1-3μg/mL。 20.一种用于检测抗-CCP抗体的均相免疫检测试剂盒，其包含权利要求1-19中任意一项所述的均相免疫检测试剂套装。 21.一种如权利要求1-19中任意一项所述的均相免疫检测试剂套装或如权利要求20所述的均相免疫检测试剂盒用于检测待测样本中抗-CCP抗体的免疫测定方法，其包括如下步骤： S1，将第一抗原与待测样本中的抗-CCP抗体结合，形成由第一抗原-抗-CCP抗体构成的第一免疫复合物； S2，将抗免疫复合物抗体与所述第一免疫复合物结合，形成由第一抗原-抗-CCP抗体-抗免疫复合物抗体所构成的第二免疫复合物； S3，检测第二免疫复合物是否存在；如果第二免疫复合物存在，则表明待测样本中存在抗-CCP抗体。 22.根据权利要求21所述的方法，其特征在于，步骤S3中通过化学发光的方法检测第二免疫复合物是否存在。 23.根据权利要求21或22所述的方法，其特征在于，所述第一免疫复合物通过第一抗原与供体结合，相应的所述第二免疫复合物通过抗免疫复合物抗体与受体结合，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测的化学发光信号，所述供体能够在激发状态产生单线态氧。 24.根据权利要求21或22所述的方法，其特征在于，所述第一免疫复合物通过第一抗原与受体结合，相应的所述第二免疫复合物通过抗免疫复合物抗体与供体结合，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测的化学发光信号，所述供体能够在激发状态产生单线态氧。 25.根据权利要求21-24中任意一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： T1，将与生物素结合的第一抗原同待检样本中的抗-CCP抗体结合，形成由生物素-第一抗原-抗-CCP抗体构成的第三免疫复合物； T2，将与受体结合的特异性识别第三免疫复合物中的抗-CCP抗体的抗免疫复合物抗体同第三免疫复合物结合，形成由生物素-第一抗原-抗-CCP抗体-抗免疫复合物抗体-受体构成的第四免疫复合物； T3，将与链霉亲和素结合的供体同第四免疫复合物结合，形成由供体-链霉亲和素-生物素-第一抗原-抗-CCP抗体-抗免疫复合物抗体-受体构成的第五免疫复合物； T4，检测第五免疫复合物是否存在；如果第五免疫复合物存在，则待测样本中存在抗-CCP抗体；或者， R1，将与受体结合的第一抗原同待检样本中的抗-CCP抗体结合，形成由受体-第一抗原-抗-CCP抗体构成的第六免疫复合物； R2，将与生物素结合的特异性识别第六免疫复合物中的抗-CCP抗体的抗免疫复合物抗体同第六免疫复合物结合，形成由受体-第一抗原-抗-CCP抗体-抗免疫复合物抗体-生物素构成的第七免疫复合物； R3，将与链霉亲和素结合的供体同第七免疫复合物中的生物素结合，形成由受体-第一抗原-抗-CCP抗体-抗免疫复合物抗体-生物素-链霉亲和素-供体所构成的第八免疫复合物； R4，检测第八免疫复合物是否存在；如果第八免疫复合物存在，则待测样本中存在抗-CCP抗体；其中，当第五免疫复合物或第八免疫复合物存在时，用能量或者活性化合物激发供体产生单线态氧，所述受体与单线态氧反应生成可检测的化学发光信号。 26.根据权利要求25所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在步骤T1或步骤R1之前制作抗-CCP抗体标准工作曲线的步骤。 27.根据权利要求26所述的方法，在步骤T4或步骤R4中，检测所述化学发光信号的强度，并基于抗-CCP抗体标准工作曲线来确定待测样品中抗-CCP抗体的含量。 28.根据权利要求25-27中任意一项所述的方法，其特征在于，利用600-700nm波长的激发光照射第五免疫复合物或第八免疫复合物，激发供体产生单线态氧，受体与接触到的单线态氧反应生成520-620nm的发射光，检测发射光的信号值，从而判断测待测样本中是否存在抗-CCP抗体和/或抗-CCP抗体的浓度。 29.一种如权利要求1-19中任意一项所述的均相免疫检测试剂套装或如权利要求20所述的均相免疫检测试剂盒或如权利要求21-28中任意一项所述的方法在检测待测样品中抗-CCP抗体的存在和/或含量中的应用，其中，所述待测样品选自血液、血液衍生物、血清、血浆、尿液、脑脊髓液、唾液、滑液和肺气肿积液。 30.一种如权利要求1-19中任意一项所述的试剂套装在制备用于检测怀疑患有类风湿性关节炎的受治疗者的待测样品中的抗-CCP抗体，由此确定所述待测样品中抗-CCP抗体的水平，并将因此确定的水平与受治疗者的类风湿性关节炎的存在、风险、潜在性或倾向性相关联的试剂盒中的应用。
所属类别：	发明专利