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原文传递一种均相免疫检测方法及其应用

专利名称：	一种均相免疫检测方法及其应用
摘要：	本发明涉及一种均相免疫检测方法，其包括至少两个检测区域，在一个检测区域判断是否存在由供体‑待检抗体‑受体所形成的第一复合物，而在另一个检测区域判断是否存在由供体‑待检抗原‑受体所形成的第二复合物；其中，所述供体能够在激发状态下生成单线态氧，所述受体能与单线态氧反应产生可检测的信号。该方法解决了抗原抗体一步法检测中的高浓度样本HOOK效应问题和低浓度样本检测灵敏度偏低问题。同时该方法也解决了抗原抗体联合检测时不能区分阳性结果是抗体阳性或抗原阳性的问题。本发明所述方法特别适用于HIV抗原和抗体的联合检测中。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京科美生物技术有限公司
发明人：	王志新;刘宇卉;李临;其他发明人请求不公开姓名
专利状态：	有效
申请日期：	2017-10-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201711017639.0
公开号：	CN109725153A
代理机构：	北京聿宏知识产权代理有限公司
代理人：	吴大建;桑胜梅
分类号：	G01N33/577(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100094 北京市海淀区永丰基地丰贤中路7号北科现代制造园孵化楼B座二层
主权项：	1.一种均相免疫检测方法，其包括至少两个检测区域，在一个检测区域判断是否存在由供体-待检抗体-受体所形成的第一复合物，而在另一个检测区域判断是否存在由供体-待检抗原-受体所形成的第二复合物；其中，所述供体能够在激发状态下生成单线态氧，所述受体能与单线态氧反应产生可检测的信号。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，当检测区域存在第一复合物和/或第二复合物时，用能量或者活性化合物激发供体产生单线态氧，所述受体与单线态氧反应生成可检测的化学发光信号。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述待检抗体选自与待检抗原特异性结合的完整抗体或基因工程化的抗体片段。 4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于，所述待检抗原选自多种不同病毒类型的抗原。 5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其特征在于，所述待检抗原选自同一被分析物的不同亚型、亚亚型或流行重组型的抗原。 6.根据权利要求1-5中任意一项所述的方法，其特征在于，所述受体和待检抗体通过标记抗原相连接；所述供体和待检抗体通过中间抗原相连接；所述标记抗原和中间抗原能够与待检抗体的不同表位特异性结合。 7.根据权利要求1-6中任意一项所述的方法，其特征在于，所述受体和待检抗原通过标记抗体相连接；所述供体和待检抗原通过中间抗体相连接；所述标记抗体和中间抗体能够与待检抗原的不同表位特异性结合。 8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述标记抗体为单克隆抗体。 9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述中间抗体为多克隆抗体。 10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其在一个检测区域准备第一组合物，并判断第一组合物中是否存在由供体-待检抗体-受体所形成的第一复合物；在另一个检测区域准备第二组合物，并判断第二组合物中是否存在由供体-待检抗原-受体所形成的第二复合物；其中，所述第一组合物包含：待检样本；与标记抗原结合的受体；中间抗原；供体；所述标记抗原和中间抗原能够与待检抗体的不同表位特异性结合；所述第二组合物包含：待检样本；与标记抗体结合的受体；中间抗体；供体；所述标记抗体和中间抗体能够与待检抗体的不同表位特异性结合。 11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：步骤S1，在一个反应区域准备第三组合物，所述第三组合物包含：待检样本、与标记抗原结合的受体以及中间抗原；在另一个反应区域准备第四组合物，所述第四组合物包含：待检样本、与标记抗体结合的受体以及中间抗体；步骤S2，将供体加入到第三组合物中，获得第一组合物；将供体加入到第四组合物中，获得第二组合物；步骤S3，将第一组合物和第二组合物分别送到检测区域，然后用能量或者活性化合物接触检测区域，激发供体产生单线态氧；当存在第一复合物和/或第二复合物时，所述受体与单线态氧反应生成可检测的化学发光信号；步骤S4，检测所述化学发光信号，判断待检样本中是否存在待检抗体和/或待检抗原以及待检抗体和/或待检抗原的含量或浓度。 12.根据权利要求10或11所述的方法，其特征在于，所述第一组合物中的待检样本在加入第一组合物前预先用稀释液进行稀释，形成稀释的待检样本。 13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述稀释的待检样本的体积稀释倍数为1:(4-20)，优选为1:(6-16)，更优选为1:(8-14)。 14.根据权利要求10-13中任意一项所述的方法，其特征在于，当第一组合物的化学发光信号值≥抗体阳性样本的临界值时，则待检样本为抗体阳性样本；当第一组合物的化学发光信号值＜抗体阳性样本的临界时，则待检样本为抗体阴性样本。 15.根据权利要求10-14中任意一项所述的方法，其特征在于，当第二组合物的化学发光信号值≥抗原阳性样本的临界值时，则待检样本为抗原阳性样本；当第二组合物的化学发光信号值＜抗原阳性样本的临界值时，则待检样本为抗原阴性样本。 16.根据权利要求1-15中任意一项所述的方法，其特征在于，所述受体包含烯烃化合物和金属螯合物。 17.根据权利要求1-16中任意一项所述的方法，其特征在于，所用试剂均为非粒子化试剂，且可溶于含水介质中。 18.一种如权利要求1-17中任意一项所述的方法在病毒感染的血清诊断中抗原和抗体联合检测中的应用。 19.一种如权利要求1-17中任意一项所述的方法在HIV抗原和抗体联合检测中的应用。 20.一种如权利要求10-19中任意一项所述的方法在HIV抗原和抗体联合检测中的应用，其特征在于：所采用的标记抗原和中间抗原均包括HIV gp41型抗原和HIV gp36型抗原；所采用的标记抗体为抗HIV p24型抗原的单克隆抗体；所采用的中间抗体为抗HIV p24型抗原的多克隆抗体。
所属类别：	发明专利