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原文传递检测抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂盒及其应用

专利名称：	检测抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂盒及其应用
摘要：	本发明涉及一种检测抗‑Carp抗体的均相免疫检测试剂盒及其制备方法和使用方法。本发明提供了一种抗‑Carp抗体的均相免疫检测试剂盒，该试剂盒所采用的检测技术为光激化学发光免疫分析法，为一种均相反应体系，相较于现有的非均相反应体系检测方法，存在着无需清洗、包被/标记工艺对抗原抗体的活性无影响、特异性高、灵敏度好、线性范围宽、背景干扰小、反应速度快、操作简便、技术要求不高等优点，并可实现全自动化高通量测试。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京科美生物技术有限公司
发明人：	廖智星;饶星;刘宇卉;李临;其他发明人请求不公开姓名
专利状态：	有效
申请日期：	2018-02-11T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201810143200.0
公开号：	CN110161249A
代理机构：	北京聿宏知识产权代理有限公司
代理人：	吴大建;方莉
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100094 北京市海淀区永丰基地丰贤中路7号北科现代制造园孵化楼B座二层
主权项：	1.检测抗-Carp抗体或所述抗-Carp抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物的存在的试剂在制备用于采用均相免疫检测方法通过下列步骤评价受治疗者的类风湿性关节炎的试剂中的用途： a)提供来自怀疑患有类风湿性关节炎的受治疗者的待测样品； b)检测所述待测样品中抗-Carp抗体或所述抗-Carp抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物；其中，所述抗-Carp抗体或免疫复合物的存在指示受治疗者的类风湿性关节炎，所述待测样品选自血液、血液衍生物、血清、血浆、尿液、脑脊髓液、唾液、滑液和肺气肿积液。 2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述步骤还包括检测抗-Carp抗体或所述抗-Carp抗体与抗原形成的免疫复合物的含量。 3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，基于抗-Carp抗体标准工作曲线来确定待测样品中抗-Carp抗体的含量。 4.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述步骤还包括将所测得的抗-Carp抗体或所述抗-Carp抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物的含量，与正常对照样品、类风湿性关节炎对照样品或来自同一受治疗者的治疗前样品中所述抗-Carp抗体或所述抗-Carp抗体与至少一种抗原形成的免疫复合物的含量进行比较。 5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述步骤包括将所述样品与包含能够与抗-Carp抗体特异性结合形成免疫复合物的至少一种抗原结合。 6.根据权利要求1-5中任意一项所述的用途，其特征在于，所述抗原包括能够与抗-Carp抗体的抗原表位第一结合位点特异性结合的第一抗原以及能够与抗-Carp抗体的抗原表位第二结合位点特异性结合的第二抗原，其中抗-Carp抗体的抗原表位第一结合位点和抗原表位第二结合位点不相重叠。 7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述第一抗原与受体结合，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测的化学发光信号。 8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述受体包含烯烃化合物和金属螯合物，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述受体为填充有发光化合物和镧系元素的高分子微粒。 9.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述第一抗原和第二抗原为氨甲酰化抗原；优选所述氨甲酰化抗原为氨甲酰化人血清白蛋白，进一步优选所述人血清白蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。 10.一种用于检测抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂套装，其包括：组分a，其包含能够与单线态氧反应生成可检测信号的受体以及与之结合的第一抗原，所述第一抗原的抗原表位能够与抗-Carp抗体的抗原表位第一结合位点特异性结合；组分b，其包含能够与抗-Carp抗体的抗原表位第二结合位点特异性结合的第二抗原，抗-Carp抗体的抗原表位第一结合位点和抗原表位第二结合位点不相重叠；组分c，其包括能够在激发状态产生单线态氧的供体。 11.根据权利要求10所述的试剂套装，其特征在于，所述第一抗原和第二抗原为氨甲酰化抗原；优选所述氨甲酰化抗原为氨甲酰化人血清白蛋白；进一步优选所述人血清白蛋白如SEQ ID No.1所示。 12.根据权利要求10或11所述的试剂套装，其特征在于，所述试剂套装还包括作为校准品的抗-Carp抗体纯品，所述校准品被校准品稀释液按照比例梯度稀释成不同浓度的工作校准品溶液。 13.根据权利要求10-12中任意一项所述的试剂套装，其特征在于，所述第二抗原与特异性结合配对物中的一员结合，而所述供体与特异性结合配对物中的另一员结合。 14.根据权利要求13所述的试剂套装，其特征在于，所述第二抗原与生物素结合，而所述供体与链霉亲和素结合。 15.根据权利要求10-14中任意一项所述的试剂套装，其特征在于：所述受体及与之结合的第一抗原的总浓度为10-200μg/mL，优选20-150μg/mL，更优选25-100μg/mL；和/或，所述第二抗原及与之结合的特异性结合配对物中的一员的总浓度为0.1-10μg/mL，优选0.5-5μg/mL，更优选1-3μg/mL。 16.根据权利要求10-15中任意一项所述的试剂套装，其特征在于，所述受体包含烯烃化合物和金属螯合物，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述受体为填充有发光化合物和镧系元素的高分子微粒。 17.根据权利要求10-16中任意一项所述的试剂套装，其特征在于，所述供体为光活化的或化学活化的敏化剂，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述供体为填充有感光化合物的高分子微粒，在光激发下能够产生单线态氧。 18.一种用于检测抗-Carp抗体的均相免疫检测试剂盒，其包含权利要求10-17中任意一项所述的均相免疫检测试剂套装。 19.一种检测待测样品中抗-Carp抗体的均相免疫检测方法，其包括使用如权利要求10-17中任意一项所述的均相免疫检测试剂套装或使用如权利要求18所述的均相免疫检测试剂盒来判断测待测样品中是否存在抗-Carp抗体和/或确定抗-Carp抗体的含量。 20.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，该方法包括：步骤R1，将待测样品与组分a和组合b混合，得到第三混合物；步骤R2，将第三混合物与组分c混合，得到第四混合物；步骤R3，使能量或者活性化合物与所述第四混合物接触，激发所述供体产生单线态氧，所述受体能够与接收到的单线态氧反应生成可检测的化学发光信号；步骤R4，检测步骤R3中所述化学发光信号的存在和/或强度，从而判断测待测样品中是否存在抗-Carp抗体和/或确定抗-Carp抗体的含量。 21.根据权利要求20所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在步骤R1之前的制作抗-Carp抗体标准工作曲线的步骤。 22.根据权利要求21所述的方法，其特征在于，在步骤R4中，检测步骤R3中所述化学发光信号的强度，并基于抗-Carp抗体标准工作曲线来确定待测样品中抗-Carp抗体的含量。 23.根据权利要求20-22中任意一项所述的方法，其特征在于，步骤R1和R2之间以及步骤R2和R3之间没有分离和/或洗涤的步骤。 24.根据权利要求20所述的方法，其特征在于，在步骤R3中，使用600-700nm波长的激发光照射第四混合物，激发供体产生单线态氧，受体与接触到的单线态氧反应生成520-620nm的发射光。 25.一种如权利要求10-17中任意一项所述的均相免疫检测试剂套装或如权利要求18所述的均相免疫检测试剂盒或如权利要求19-24中任意一项所述的方法在检测待测样品中抗-Carp抗体的存在和/或含量中的应用，其中，所述待测样品选自血液、血液衍生物、血清、血浆、尿液、脑脊髓液、唾液、滑液和肺气肿积液。 26.一种如权利要求10-17中任意一项所述的试剂套装在制备用于检测类风湿性关节炎的试剂盒中的应用，其包括：步骤M1，提供来自待测主体的待测样品；步骤M2，判断测待测样品中是否存在抗-Carp抗体和/或确定抗-Carp抗体的含量；步骤M3，将其与正常对照样品、类风湿性关节炎对照样品、或来自同一待测主体的治疗前的样品中所述抗-Carp抗体的含量比较；其中，所述待测样品选自所述待测样本选自血液、血液衍生物、血清、血浆、尿液、脑脊髓液、唾液、滑液和肺气肿积液。 27.根据权利要求26所述的应用，其特征在于，与正常对照样样品相比，所述待测样品中抗-Carp抗体的存在是所述待测主体中类风湿性关节炎的诊断性指示物。 28.根据权利要求26所述的应用，其特征在于，与正常对照样样品相比，所述待测样品中抗-Carp抗体的含量的增加是所述待测主体中类风湿性关节炎的诊断性指示物。 29.根据权利要求28所述的应用，其特征在于，与正常对照样样品相比，所述待测样品中抗-Carp抗体的含量不低于123.5U/ml是所述待测主体中类风湿性关节炎的诊断性指示物。 30.根据权利要求26所述的应用，其特征在于，与类风湿性关节炎对照样品相比，所述待测样品中抗-Carp抗体的相对含量是所述待测主体中类风湿性关节炎的预后性指示物。 31.根据权利要求26所述的应用，其特征在于，与来自同一待测主体的治疗前的样品相比，所述待测样品中抗-Carp抗体的相对含量指示治疗方案的效力。 32.根据权利要求26-31中任意一项所述的应用，其特征在于，在步骤M2中，采用如权利要求18-24中任意一项所述的方法来判断测待测样品中是否存在抗-Carp抗体和/或确定抗-Carp抗体的含量。
所属类别：	发明专利