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原文传递一种均相人心肌肌钙蛋白I快速检测试剂盒、系统、检测方法与应用

专利名称：	一种均相人心肌肌钙蛋白I快速检测试剂盒、系统、检测方法与应用
摘要：	本发明涉及一种人心肌肌钙蛋白I cTnI检测试剂盒的制备方法，包括制备包含受体以及与之结合的第一结合单元的组分，受体能与单线态氧反应生成可检测信号，第一结合单元能结合cTnI的第一表位；制备包含第一标记物以及与之结合的第二结合单元的组分，第二结合单元能结合cTnI的第二表位，第二表位与第一表位是cTnI的不同结合特性的表位或不同位置的相同结合特性的表位；制备包含供体以及与之结合的第一标记物的特异结合物的组分，供体能够在激发状态产生单线态氧。该方法制备的试剂盒能够高效地检测人心肌肌钙蛋白I。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	博阳生物科技(上海)有限公司
发明人：	洪琳;孙小禁;杨阳;赵卫国;刘宇卉;李临
专利状态：	有效
申请日期：	2018-02-11T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201810143202.X
公开号：	CN110161250A
代理机构：	北京聿宏知识产权代理有限公司
代理人：	吴大建;桑胜梅
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	201210 上海市浦东新区蔡伦路88号五楼东面
主权项：	1.一种人心肌肌钙蛋白I均相快速检测试剂盒的制备方法，所述制备方法包括：制备第一组分，所述第一组分包含受体以及与之结合的第一结合单元，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测信号，所述第一结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第一表位；制备第二组分，所述第二组分包含第一标记物以及与之结合的第二结合单元，所述第二结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第二表位，所述第二表位与所述第一表位是人心肌肌钙蛋白I的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位；制备第三组分，所述第三组分包含供体以及与之结合的所述第一标记物的特异结合物，所述供体能够在激发状态产生单线态氧。 2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述第一结合单元和所述第二结合单元分别独立选自与人心肌肌钙蛋白I具有结合特异性的多克隆抗体、单克隆抗体、抗体结合片段、人工抗体、修饰的抗体，优选选自多克隆抗体和/或单克隆抗体。 3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述第一结合单元和/或所述第二结合单元独立包含至少两种能够与人心肌肌钙蛋白I的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位具有结合特异性的不同的单克隆抗体、抗体结合片段、人工抗体或修饰的抗体。 4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述第一标记物为生物素，所述第一标记物的所述特异结合物为链霉亲和素。 5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述受体包含烯烃化合物和金属螯合物，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述受体为填充有发光化合物和镧系元素的高分子微粒。 6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述供体为光活化的或化学活化的敏化剂，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述供体为填充有感光化合物的高分子微粒，在光激发下能够产生单线态氧。 7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括：制备第一组合物，所述第一组合物包括所述第一组分和第一缓冲液；制备第二组合物，所述第二组合物包括所述第二组分和第二缓冲液；制备第三组合物，所述第三组合物包括所述第三组分和第三缓冲液。 8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述第一结合单元与所述受体间接结合；优选地，所述第一结合单元与所述受体通过异硫氰酸荧光素-异硫氰酸荧光素抗体系统间接结合。 9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述第一组合物、所述第二组合物与所述第三组合物中的任一个、任两个或三个还包含表面活性剂，优选非离子表面活性剂，更优选直链非离子表面活性剂，最优选聚乙二醇型直链非离子表面活性剂。 10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述第三组合物中的表面活性剂的重量体积浓度为0.001％-0.1％，优选0.01％-0.04％，更优选0.02％。 11.一种用于均相检测人心肌肌钙蛋白I的试剂盒，所述试剂盒是根据权利要1-10中任一项所述的人心肌肌钙蛋白I均相快速检测试剂盒的制备方法制备得到的。 12.根据权利要求11所述的剂盒，其特征在于，所述第一组合物中的所述第一组分的浓度选自20～300μg/mL，优选30～200μg/mL，更优选40～100μg/mL。 13.根据权利要求11或12所述的试剂盒，其特征在于，所述第二组合物中的所述第二组分的浓度选自：0.2～10μg/mL，优选0.5～8μg/mL，更优选1～6μg/mL。 14.一种人心肌肌钙蛋白I均相快速检测的方法，其使用如权利要求11-13中任一项所述的试剂盒进行化学发光检测。 15.如权利要求14所述的方法，其包括如下步骤：步骤S1，同时或完全或依次组合： a.疑似含有人心肌肌钙蛋白I的待检测样本； b.第一组合物，所述第一组合物包括第一组分和第一缓冲液；所述第一组分包含受体以及与之结合的第一结合单元，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测信号，所述第一结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第一表位； c.第二组合物，所述第二组合物包括第二组分和第二缓冲液；所述第二组分包含第一标记物以及与之结合的第二结合单元，所述第二结合单元能够结合人心肌肌钙蛋白I的第二表位，所述第二表位与所述第一表位是人心肌肌钙蛋白I的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位； d.第三组合物，所述第三组合物包括第三组分和第三缓冲液；所述第三组分包含供体以及与之结合的所述第一标记物的特异结合物，所述供体能够在激发状态产生单线态氧；步骤S2，将V1体积待检测样本与V2体积所述第一组合物和V3体积所述第二组合物混合后进行第一反应，得到第一混合物；控制所述反应的温度为K1以及反应的时长为T1；步骤S3，将所述第一混合物与所述第三组合物混合后进行第二反应，得到第二混合物；控制所述反应的温度为K2以及反应的时长为T2；步骤S4，利用能量或者活性化合物激发所述第二混合物中的所述供体产生单线态氧，所述受体能够与接收到的单线态氧反应生成可检测的化学发光信号，通过检测化学发光信号的存在和/或强度，从而确定待检测样本中是否含有人心肌肌钙蛋白I和/或人心肌肌钙蛋白I的含量；其中，T1≤15min，T2≤5min，且T1+T2≤15min。 16.如权利要求15所述的方法，其特征在于：步骤S2中，首先将待检测样本与所述第一组合物混合后得到第三混合物，然后再将所述第三混合物与所述第二组合物混合后得到所述第一混合物。 17.如权利要求15或16所述的人心肌肌钙蛋白I均相快速检测方法，其特征在于：所述K1和/或K2的温度分别独立地选自35-45℃，优选选自37-42℃。 18.根据权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于，所述T1≤12min；优选地，所述T1≤10min；进一步优选地，所述T1≤8min；更优选地，所述T1≤6min。 19.根据权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于，所述T2≤3min；优选地，所述T2≤2min。 20.根据权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于，所述T1+T2≤13min；优选地，所述T1+T2≤12.5min；进一步优选地，所述T1+T2≤10min；更优选地，所述T1+T2≤8min。 21.根据权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于，所述T1为8min，所述T2为2min。 22.根据权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于，5≤V1≤100μL，优选20≤V1≤120μL，更优选40≤V1≤100μL。 23.根据权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于，5≤V2≤50μL，优选8≤V2≤40μL，更优选10≤V2≤25μL。 24.根据权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于，5≤V3≤50，优选8≤V3≤40μL，更优选10≤V3≤25μL。 25.根据权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于，所述方法的检测灵敏度小于等于5pg/mL。 26.如权利要求15-17中任意一项所述的方法，其特征在于：在步骤S4中，使用600-700nm波长的激发光照射所述第二混合物物，激发所述供体产生单线态氧，所述受体与接触到的单线态氧反应生成520-620nm的发射光，通过检测发射光信号的存在和/或强度，从而判断待检测样本中是否存在人心肌肌钙蛋白I和/或确定人心肌肌钙蛋白I的含量。 27.一种人心肌肌钙蛋白I均相快速检测装置，其利用如权利要求11-13中任一项所述的试剂盒或者如权利要求14-26所述的检测的方法检测人心肌肌钙蛋白I。 28.根据权利要求27所述的装置，其包括如下部分：加样模块、试剂模块、温育模块、检测模块以及电路控制模块；所述温育模块、所述试剂模块、所述加样模块、所述温育模块以及所述检测模块均与所述电路控制模块电连接。 29.根据权利要求28所述的装置，其特征在于，所述试剂模块包括用于加入第一组合物的第一组件以及用于加入第二组合物的第二组件。 30.权利要求11-13中任一项所述的试剂盒或者如权利要求14-26中任一项所述的检测的方法或者权利要求27-29中任一项所述的装置在POCT检测技术中的应用。 31.一种如权利要求11-13中任一项所述的人心肌肌钙蛋白I均相快速检测试剂盒或如权利要求14-26中任一项所述的方法在检测待检测样本中人心肌肌钙蛋白I的存在与否和/或含量中的应用。 32.一种如权利要求1-10中任一项所述的方法在制备用于检测怀疑患有心肌损伤的受治疗者或待体检者的待检测样本中的人心肌肌钙蛋白I，由此确定待检测样本中人心肌肌钙蛋白I的水平，并将由此确定的水平与受治疗者的心肌损伤的存在、风险、潜在性或倾向性相关联的试剂盒中的应用。
所属类别：	发明专利