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原文传递一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒及其制备方法

专利名称：	一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明属于医学检验领域，具体涉及一种人体内钙卫蛋白含量的检测试剂盒及其制备方法，包括试剂R1，其为包被钙卫蛋白单抗1的胶乳颗粒；以及试剂R2，其为包被钙卫蛋白单抗2的胶乳颗粒。本发明克服了现有的胶乳免疫比浊法钙卫蛋白检测试剂盒中试剂R1以及试剂R2在使用过程中会出现混合不均的现象，导致试剂空白以及反应幅度波动，同时试剂R2中的多抗会与Ⅷ型胶原、补体C1q和Ⅷ因子有交叉反应，影响测试结果准确性，本发明中的试剂R1以及R2均为胶乳试剂，提升两者的混合均匀性，避免出现试剂空白以及反应幅度大幅波动的现象；通过将钙卫蛋白单抗替换传统试剂中使用的钙卫蛋白多抗，避免了额外的交叉反应，提升了试剂的检测精确性以及稳定性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	杭州博谱医药科技有限公司
发明人：	朱永良;陈佳明;杨晓东;曹静
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910410778.2
公开号：	CN110161254A
代理机构：	杭州杭诚专利事务所有限公司
代理人：	尉伟敏
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	311121 浙江省杭州市余杭区仓前街道龙潭路8号1幢105室
主权项：	1.一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试剂R1、R2、标准品以及质控品；所述的试剂R1为包被钙卫蛋白单抗1的胶乳颗粒R1；所述的试剂R2 为包被钙卫蛋白单抗2的胶乳颗粒R2；所述的标准品为使用小牛血清梯度稀释的人钙卫蛋白抗原溶液；所述的质控品为使用小牛血清梯度稀释的人钙卫蛋白抗原溶液。 2.根据权利要求1所述的一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂R1制备方法如下：将胶乳颗粒在活化准备液的作用下形成活性酯，再将所述活性酯与含有钙卫蛋白单抗1的抗体溶液1反应，然后再加入封闭剂完成偶联，得到包被钙卫蛋白单抗1的胶乳颗粒R1。 3.根据权利要求2所述的一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述的抗体溶液1中钙卫蛋白单抗1的的浓度为2mg/mL。 4.根据权利要求1所述的一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂R1制备方法如下：将胶乳颗粒在活化准备液的作用下形成活性酯，再将所述活性酯与含有钙卫蛋白单抗2的抗体溶液2反应，然后再加入封闭剂完成偶联，得到包被钙卫蛋白单抗2的胶乳颗粒R1。 5.根据权利要求4所述的一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述的抗体溶液2中钙卫蛋白单抗2的浓度为2mg/mL。 6.根据权利要求2或4所述的一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述的活化准备液为活化准备液1以及活化准备液2的组合物，其中所述的活化准备液1为N-羟基琥珀酰亚胺纯化水溶液，所述的活化准备液2为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐纯化水溶液。 7.根据权利要求6所述的一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述的活化准备液1的配制方法如下：准确称量50mg N-羟基琥珀酰亚胺，用2mL纯化水溶解，摇晃均匀得到活化准备液1；所述的活化准备液2的配制方法如下：准确称量30mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，用4mL纯化水溶解，摇晃均匀得到活化准备液2。 8.根据权利要求2或4所述的一种人血清钙卫蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述的封闭剂为2%BSA纯化水溶液以及5%吐温20纯化水溶液的组合物。 9.一种制备如权利要求1~8所述的人血清钙卫蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：（1）试剂R1的制备：制备包被钙卫蛋白单抗1的胶乳颗粒R1；（2）试剂R2的制备：制备包被钙卫蛋白单抗2的胶乳颗粒R2；（3）标准品的制备：以人钙卫蛋白抗原为母液，使用小牛血清梯度稀释母液，制备浓度为8 mg/L， 4 mg/L， 2 mg/L、1 mg/L以及纯小牛血清的校准品；（4）质控品的制备：以人钙卫蛋白抗原为母液，使用小牛血清梯度稀释母液，制备浓度为1mg/L以及4mg/L的质控品；（5）将试剂R1、试剂R2、标准品以及质控品单独分装，密封保存即得。 10.根据权利要求9所述的一种制备人血清钙卫蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备包被钙卫蛋白单抗1的胶乳颗粒R1的具体步骤如下：（1-1）在离心管内分别加入230μL纳米胶乳颗粒，300μLMES缓冲液，加入30μL 活化准备液1和30ul的活化准备液2，在37℃金属浴振荡器中震荡20min，4℃15000 r/min高速离心1小时，弃上清液；（1-2）在沉淀中加入等体积的PBS缓冲液置于冰浴中，超声振荡3min，超声1秒，间隔3秒，再加入2mL PBS缓冲液，0.5mL抗体溶液1，在37℃金属浴振荡器中震荡60min，4℃15000r/min高速离心1小时，弃上清液；（1-3）在沉淀中加入等体积的PBS缓冲液置于冰浴中，超声振荡3min，超声1秒，间隔3秒，再加入75μL 吐温20溶液和225μL BSA溶液，在37℃金属浴振荡器中震荡5min；（1-4）继续加入3mLPBS缓冲液，在37℃金属浴振荡器中震荡10min；（1-5）再加入0.06gPEG8000粉末，充分摇匀溶解；（1-6）加入5μL ProClin 300，得到包被钙卫蛋白单抗1的胶乳颗粒R1；制备包被钙卫蛋白单抗2的胶乳颗粒R2的具体步骤如下：（2-1）在离心管内分别加入230μL 纳米胶乳颗粒，300μLMES缓冲液，加入30μL 活化准备液1和30ul的活化准备液2，在37℃金属浴振荡器中震荡20min，4℃15000 r/min高速离心1小时，弃上清液；（2-2）在沉淀中加入等体积的PB缓冲液置于冰浴中，超声振荡3min，超声1秒，间隔3秒，再加入2mL PB缓冲液，0.5mL抗体溶液2，在37℃金属浴振荡器中震荡60min，4℃15000 r/min高速离心1小时，弃上清液；（2-3）在沉淀中加入等体积的PB缓冲液置于冰浴中，超声振荡3min，超声1秒，间隔3秒，再加入75μL 吐温20溶液和225μL BSA溶液，在37℃金属浴振荡器中震荡5min；（2-4）继续加入3mLPB缓冲液，在37℃金属浴振荡器中震荡10min；（2-5）加入5μL ProClin 300，得到包被钙卫蛋白单抗2的胶乳颗粒R2。
所属类别：	发明专利