专利名称: |
一种基于酶分子的对苯酚类化合物的检测方法 |
摘要: |
本发明涉及一种基于酶分子的对苯酚类化合物的检测方法,使用生长在铟锡氧化物(ITO)表面并担载了HRP的介孔二氧化硅薄膜(MSF)作为电极,利用HRP的氧化还原催化能力对苯酚类化合物进行电化学检测。采用本发明方法,对苯酚、邻苯二酚、对苯二酚、间苯二酚的检测限一次为0.12μM、0.08μM、0.24μM、0.004μM;敏感度分别为47nAμM‑1、75nAμM‑1、15nAμM‑1和146nAμM‑1。本发明方法适用于具有各类结构的苯酚类化合物的电化学检测,尤其对间苯二酚具有较高的灵敏度。 |
专利类型: |
发明专利 |
国家地区组织代码: |
山东;37 |
申请人: |
滨州学院 |
发明人: |
肖宇 |
专利状态: |
有效 |
申请日期: |
2019-07-10T00:00:00+0800 |
发布日期: |
2019-09-10T00:00:00+0800 |
申请号: |
CN201910617674.9 |
公开号: |
CN110220958A |
代理机构: |
济南舜科知识产权代理事务所(普通合伙) |
代理人: |
张帅 |
分类号: |
G01N27/30(2006.01);G;G01;G01N;G01N27 |
申请人地址: |
256600 山东省滨州市黄河五路391号 |
主权项: |
1.一种基于酶分子的对苯酚类化合物的检测方法,其特征在于,包括如下步骤: 1)MSF@ITO的合成 基于自组装的原理,选择合适的硅源、表面活性剂制成溶胶溶液,将清洗后的ITO薄膜浸入到溶胶溶液中5s后匀速垂直提出,室温下自然干燥,用索氏提取器去除孔道中的表面活性剂,得MSF@ITO电极; 2)HRP的固定化 将MSF@ITO电极加入到含HRP的缓冲溶液中,对HRP进行固定化,在固定化过程调变缓冲溶液的pH,得到一系列HRP担载量不同的HRP/MSF@ITO薄膜电极,通过研究固定化HRP的活力与固定量之间的关系,选择具有最高活力的固定化HRP电极进行苯酚类化合物的检测; 3)HRP/MSF@ITO的电化学工作性能 以[Fe(CN)6]3-为探针分子,通过循环伏安曲线考察HRP/MSF@ITO电极的电化学工作能力; 4)HRP/MSF@ITO对苯酚类化合物的检测 运用循环伏安曲线确定HRP/MSF@ITO对苯酚类化合物的检出限及敏感度。 2.如权利要求1所述的基于酶分子的对苯酚类化合物的检测方法,其特征在于,所述步骤1)中的硅源为TEOS和APTES,表面活性剂为F127。 3.如权利要求2所述的基于酶分子的对苯酚类化合物的检测方法,其特征在于,所述步骤1)MSF@ITO的合成步骤具体为: 取0.5g1.5molL-1的HCl加入到5.45g质量分数为5%的F127乙醇溶液中搅拌混合,混合均匀后,将1.0gTEOS和0.095gAPTES滴加到混合溶液中得到溶胶溶液,溶胶溶液在室温下继续陈化2h,ITO薄膜经过丙酮和乙醇清洗后,浸入到溶胶溶液中5s后匀速垂直提出,室温条件下自然干燥,待MSF@ITO完全干燥后通过索氏提取器去除孔道中的表面活性剂,用无水乙醇作为萃取液。 4.如权利要求1所述的基于酶分子的对苯酚类化合物的检测方法,其特征在于,所述步骤2)HRP的固定化的具体步骤为: 将面积为1cm2的MSF@ITO加入到5mL含HRP的pH6.0的缓冲溶液中,置于摇床上,在4℃条件下固定16h,固定完成后,用5mL缓冲溶液清洗三次,将清洗液收集到一起,测量固定液前后在401nm处的吸收值,通过标准曲线计算载体的HRP固定量。 5.如权利要求4所述的基于酶分子的对苯酚类化合物的检测方法,其特征在于,所述步骤2)中缓冲溶液浓度为0.1molmL-1,该缓冲溶液中HRP的浓度为1mgmL-1。 6.如权利要求1所述的基于酶分子的对苯酚类化合物的检测方法,其特征在于,所述步骤3)HRP/MSF@ITO的电化学工作性能测试步骤如下: 将HRP/MSF@ITO电极置于0.83mM[Fe(CN)6]3-、1.67mM[Fe(CN)6]3-、2.50mM[Fe(CN)6]3-、3.33mM[Fe(CN)6]3-、4.17mM[Fe(CN)6]3-溶液中进行循环伏安测试,得到峰型对称性良好的氧化还原峰,表明该电极具有作为工作电极的电化学工作能力。 7.如权利要求1所述的基于酶分子的对苯酚类化合物的检测方法,其特征在于,所述步骤4)HRP/MSF@ITO对苯酚类化合物的检测步骤如下: 将HRP/MSF@ITO电极置于从15μM至80μM的苯酚类化合物的磷酸缓冲溶液中,磷酸缓冲溶液浓度0.1M、pH6.0,扫速为0.1mV/s进行循环伏安扫描,得到还原电流与苯酚类化合物浓度的线性关系,得出检出限、敏感度。 8.如权利要求1所述的基于酶分子的对苯酚类化合物的检测方法,其特征在于,所述步骤4)中的苯酚类化合物为邻苯二酚、苯酚、对苯二酚、间苯二酚中的一种。 |
所属类别: |
发明专利 |