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原文传递实时灵敏生物大分子检测方法及试剂盒制备

专利名称：	实时灵敏生物大分子检测方法及试剂盒制备
摘要：	本发明提供一种实时灵敏生物大分子检测方法及试剂盒制备，利用柠檬酸修饰Fe3O4纳米粒子，得到表面为柠檬酸修饰Fe3O4纳米粒子；氨基修饰的Fe3O4纳米微粒2g于室温下180r/min搅拌中迅速加入20mL所制备的金纳米粒子溶液中，混合溶液由棕色逐渐变淡，低速搅拌反应12h后，获得金磁微粒Fe3O4@Au，并制备纳米生物传感器；减少了常用生物大分子测定研究中抗体抗原之间的结合的时间，明显缩短了反应过程，提高反应的效率，有效提高了信噪比，实现了实时灵敏快速检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	武汉巴菲尔生物技术服务有限公司
发明人：	冷毅斌;吴娟;寇小娟
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-22T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910133887.4
公开号：	CN110161231A
代理机构：	武汉蓝宝石专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	廉海涛
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新二路388号光谷国际生物医药企业加速器一期工程1号厂房一单元305室
主权项：	1.一种纳米生物传感器制备方法，其特征在于，包括：将10g新鲜橘子皮粉碎并浸泡于100mL的去离子水中，再将浸泡液于3600r/min条件下，离心3min，取上清液，此上清液即为原液，冰箱4℃条件下保存；室温条件下，将提前4℃预冷的20mL氯金酸溶液(1％，W/V)置于反应皿中，伴随磁力搅拌器温和搅动；2min后，迅速加入橘皮浸泡工作液5mL，工作液为20％原液，随即观察颜色的变化，即由黄色变为紫色再变为酒红色，当体系颜色出现酒红色时，搅拌速度提升，10min后结束反应，获得金纳米粒子，将反应液置于冰箱4℃条件下保存；利用柠檬酸修饰Fe3O4纳米粒子，得到表面为柠檬酸修饰Fe3O4纳米粒子；取2g合成的Fe3O4纳米微粒超声分散在50mL含有20％乙醇水溶液中，逐滴加入1mLAPTES，室温下搅拌7h反应结束后得到浅棕色带细微颗粒的悬浊液，产物即为氨基化修饰后的Fe3O4纳米微粒；此产物用0.1mol/L的HCl－乙醇溶液磁分离清洗3次，烘干后备用；取上述制备的氨基修饰的Fe3O4纳米微粒2g于室温下180r/min搅拌中迅速加入20mL所制备的金纳米粒子溶液中，混合溶液由棕色逐渐变淡，低速搅拌反应12h后，获得金磁微粒Fe3O4@Au；取金磁微粒，用偶联缓冲液平衡3次，将生物分子按20～500μg/mg金磁微粒的比例加入经平衡处理的金磁微粒中，置于20～40℃、180r/min的空气恒温振荡器中充分反应16h；反应完毕，在磁性分离器上分离2～3min，弃上清，用清洗缓冲液清洗，去除非特异性结合的分子；封闭：加入500μL～2mL的封闭剂到表面已固定生物分子的金磁微粒中，置于20～40℃、180r/min的空气恒温振荡器中充分混匀20min～12h进行封闭，得到纳米生物传感器。 2.根据权利要求1所述的纳米生物传感器制备方法，其特征在于，利用柠檬酸修饰Fe3O4纳米粒子，得到表面为柠檬酸修饰Fe3O4纳米粒子，具体包括：将以共沉淀合成方法制备得到的Fe3O4纳米粒子水相悬浮液加入反应器中，搅拌并通氮气后，加入柠檬酸水溶液，并在60℃的温度下反应；反应后冷却至室温，磁性分离，洗涤后，重新分散在超纯水中，作为磁性纳米粒子储备液。 3.根据权利要求2所述的纳米生物传感器制备方法，其特征在于，柠檬酸溶液的浓度为0.05g/ml～0.15g/ml，Fe3O4纳米粒子浓度为0.006g/ml～0.02g/ml；Fe3O4纳米粒子与柠檬酸溶液的体积比为15:1～10:1；反应温度在65～75℃之间，反应保持10～15min。 4.一种根据权利要求1至3任一所述方法制备的纳米生物传感器。 5.一种试剂盒，其特征在于，包括如权利要求4所述的纳米生物传感器。 6.一种实时灵敏生物大分子检测方法，其特征在于，包括：将固定好生物分子且已封闭的金磁微粒和待测溶液加入到偶联缓冲液中，置于20～40℃、180r/min的空气恒温振荡器中充分反应10min～12h；反应完毕，在磁性分离器上分离2～3min，用清洗缓冲液清洗，去除非特异性结合的分子，并将金磁微粒复合物保存在保存缓冲液中；根据反应结果确定待测溶液是否含有待检测的目标分子。
所属类别：	发明专利