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原文传递一种基于适配体荧光传感的铜绿假单胞菌检测方法

专利名称：	一种基于适配体荧光传感的铜绿假单胞菌检测方法
摘要：	本发明公开了一种基于适配体荧光传感的铜绿假单胞菌检测方法，通过将适配体与荧光信号策略相结合，开发了一种简单并且选择性强的荧光生物传感器（适配体荧光传感器），用于铜绿假单胞菌的检测。本发明通过将适配体与荧光信号策略相结合，将修饰有BHQ‑2和cy5的特异性探针发卡结构DNA和单链DNA适配体混合杂交，在混合液加入菌体后，细菌会和单链DNA适配体特异性结合，将单链DNA和发卡结构DNA分开，发卡结构重新恢复，cy5的荧光再一次被淬灭。本发明将DNA适配体、活菌、荧光信号巧妙地结合在一起，构建了一个十分简单的检测活菌的体系，这种检测方法不仅简单、快速、灵敏、对设备要求低、可应用到活菌的在线监测上。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	福州大学
发明人：	陈宪;徐礼明
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201910459408.8
公开号：	CN110161240A
代理机构：	福州元创专利商标代理有限公司
代理人：	饶文君;蔡学俊
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	350108 福建省福州市闽侯县上街镇福州大学城学院路2号福州大学新区
主权项：	1.一种基于适配体荧光传感的铜绿假单胞菌检测方法，其特征在于，通过将适配体与荧光信号策略相结合，将修饰有BHQ-2和cy5的特异性探针发卡结构DNA和单链DNA适配体混合杂交，在混合液加入菌体后，细菌会和单链DNA适配体特异性结合，将单链DNA和发卡结构DNA分开，发卡结构重新恢复，cy5的荧光再一次被淬灭；所述特异性探针发卡结构DNA序列： 5’-cy5-CCCCCGTTGCAAACGAACAAAAGCGAAAGGAAAAGCGAAAGCAACGGGGG-BHQ-2-TACGGA-3’。 2.根据权利要求1所述一种基于适配体荧光传感的铜绿假单胞菌检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）细菌培养：将铜绿假单胞菌ATCC 27853冻干粉复苏，分别划线接种于Lb营养琼脂平板和Lb液体培养基中，Lb营养琼脂平板放置于20℃冰箱中培养，液体培养基放置于恒温培养箱，设置转速150r/min培养；收获培养物用于检测；得到的活细菌悬浮液可直接使用或在4℃下储存；（2）利用涂布法计数铜绿假单胞菌菌落，计算用于检测的细菌浓度；（3）将修饰有BHQ-2和cy5的特异性探针发卡结构DNA和铜绿假单胞菌适配体单链DNA混合杂交，未混合前由于BHQ-2的淬灭作用，cy5被淬灭；然后按1:1的摩尔比将单链和发卡结构DNA混合后，形成DNA杂交双链，cy5远离淬灭基团，cy5发荧光；（4）将所得的双链DNA复合物与培养获得的菌体混合后，细菌会和单链DNA适配体特异性结合，将单链DNA和发卡结构DNA分开；（5）利用荧光光谱仪对荧光的变化进行分析，获得荧光的变化。 3.根据权利要求2所述一种基于适配体荧光传感的铜绿假单胞菌检测方法，其特征在于，步骤（1）所述恒温培养箱的培养温度为38℃，培养时间为48小时。 4.根据权利要求2所述一种基于适配体荧光传感的铜绿假单胞菌检测方法，其特征在于，所述单链DNA为铜绿假单胞菌的适配体，特异性探针发卡DNA与其部分互补，可被单链DNA打开。
所属类别：	发明专利