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原文传递一种检测铜绿色假单胞菌的方法

专利名称：	一种检测铜绿色假单胞菌的方法
摘要：	本发明涉及一种检测铜绿色假单胞菌的方法，包括以下步骤：（1）制备检测线包被铜绿色假单胞菌抗体、质控线包被羊抗鼠IgG抗体的试纸条；（2）在试纸条检测区域下方放置磁铁；（3）检测铜绿色假单胞菌含量。该发明中所使用的金磁纳米颗粒（Fe3O4@AuNPs）既用于在样品预处理步骤中富集铜绿色假单胞菌，又在随后的免疫层析检测中用于构建信号探针，减少了操作步骤，降低了成本。本发明的试纸条具有检测限低、特异性好、成本低廉、检测时间短等优势，能够满足现场快速检测的需求，适用于液体样品中致病菌及各种有毒有害物质的检测，极具实用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	齐鲁工业大学
发明人：	吴正宗;刘鹏飞;袁超;崔波;于滨;郭丽;赵海波;陶海腾
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910841461.4
公开号：	CN110470839A
代理机构：	济南泉城专利商标事务所
代理人：	王翠翠
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	250399 山东省济南市长清区大学路3501号
主权项：	1.一种检测铜绿色假单胞菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备检测线包被铜绿色假单胞菌抗体、质控线包被羊抗鼠IgG抗体的试纸条；（2）在试纸条检测区域下方放置磁铁；（3）金磁纳米颗粒的制备：在Fe3O4@AuNPs表面修饰铜绿色假单胞菌抗体和拉曼信标分子；（4）检测铜绿色假单胞菌含量。 2.根据权利要求1所述的一种检测铜绿色假单胞菌的方法，其特征在于，所述的磁铁的磁场强度在30mT-300mT。 3.根据权利要求1所述的一种检测铜绿色假单胞菌的方法，其特征在于，所述的试纸条包括衬板、样品垫、纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述样品垫、金磁纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸由后到前依次粘贴吸附在所述衬板上，所述硝酸纤维素膜上划有一根检测线和一根质控线；所述检测线包被铜绿色假单胞菌抗体；所述质控线包被羊抗鼠IgG抗体。 4.根据权利要求3所述的一种检测铜绿色假单胞菌的方法，其特征在于，试纸条的制备方法包括以下步骤：（1）金磁纳米颗粒的制备：合成磁性纳米颗粒Fe3O4，在其表面包被一层金壳，得到Fe3O4@AuNPs纳米颗粒，在Fe3O4@AuNPs表面修饰铜绿色假单胞菌抗体和拉曼信标分子；（2）样品富集预处理：将修饰铜绿色假单胞菌抗体和拉曼信标分子的Fe3O4@AuNPs纳米颗粒溶液加入到样品溶液中充分反应，富集样品中存在的铜绿色假单胞菌，然后在外加磁场条件下，分离出结合铜绿色假单胞菌的免疫磁性纳米颗粒，重新溶解在PBS溶液中；（3）硝基纤维膜的处理：将铜绿色假单胞菌抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测线，将羊抗鼠IgG抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测质控线，烘干，即得到处理后的硝基纤维膜；（4）试纸条的组装：在衬板上依次搭接并粘贴处理后的样品垫、结合垫和硝酸纤维素膜，再在酸纤维素膜的一侧搭接吸水纸，组装后裁剪为60mm长，3.8mm宽的试纸条，即得到所述定量检测铜绿色假单胞菌的免疫层析试纸条，将制得的试纸条与干燥剂一起装入避光袋密封保存待用。 5.根据权利要求1所述的一种检测铜绿色假单胞菌的方法，其特征在于，试纸条还包括金磁纳米颗粒标记物结合垫有修饰铜绿色假单胞菌抗体和拉曼信标分子的金磁纳米颗粒Fe3O4@AuNPs。 6.根据权利要求1所述的一种检测铜绿色假单胞菌的方法，其特征在于，金磁纳米颗粒Fe3O4@ AuNPs直径为30-200nm。 7.根据权利要求6所述的一种检测铜绿色假单胞菌的方法，其特征在于，所述的试纸条包括衬板、样品垫、纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述样品垫、金磁纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸由后到前依次粘贴吸附在所述衬板上，所述硝酸纤维素膜上划有一根检测线和一根质控线；所述检测线包被铜绿色假单胞菌抗体；所述质控线包被羊抗鼠IgG抗体；所述金磁纳米颗粒标记物结合垫有修饰铜绿色假单胞菌抗体和拉曼信标分子的金磁纳米颗粒Fe3O4@AuNPs。 8.根据权利要求6或7所述的一种检测铜绿色假单胞菌的方法，其特征在于，试纸条的制备方法包括以下步骤：（1）金磁纳米颗粒的制备：合成磁性纳米颗粒Fe3O4，在其表面包被一层金壳，得到Fe3O4@AuNPs纳米颗粒，在Fe3O4@AuNPs表面修饰铜绿色假单胞菌抗体和拉曼信标分子；（2）结合垫的处理：将修饰铜绿色假单胞菌抗体和拉曼信标分子的Fe3O4@AuNPs纳米颗粒溶液喷于结合垫上，得到处理后的标记物结合垫；（3）硝基纤维膜的处理：将铜绿色假单胞菌抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测线，将羊抗鼠IgG抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测质控线，烘干，即得到处理后的硝基纤维膜；（4）试纸条的组装：在衬板上依次搭接并粘贴处理后的样品垫、结合垫和硝酸纤维素膜，再在酸纤维素膜的一侧搭接吸水纸，组装后裁剪为60mm长，3.8mm宽的试纸条，即得到所述定量检测铜绿色假单胞菌的免疫层析试纸条，将制得的试纸条与干燥剂一起装入避光袋密封保存待用。 9.根据权利要求1-8之一所述的一种检测铜绿色假单胞菌的方法，其特征在于，铜绿色假单胞菌为单克隆抗体或多克隆抗体，Fe3O4@AuNPs表面修饰的拉曼信标分子可为4-巯基苯甲酸、对氨基苯硫酚、5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)。 10.根据权利要求1-9之一所述的一种检测铜绿色假单胞菌的方法，其特征在于，样品溶液在试纸条上层析，结束后，加入去离子水冲洗检测区域以洗去未反应的信号探针分子，采用配备785nm激光的拉曼光谱仪采集检测线和质控线的SERS光谱，基于SERS光谱定量测定样品中的铜绿色假单胞菌含量。
所属类别：	发明专利