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原文传递淡水鱼中隐性孔雀石绿的快速提取和检测方法

专利名称：	淡水鱼中隐性孔雀石绿的快速提取和检测方法
摘要：	本发明涉及隐性孔雀石绿的检测方法，具体涉及，淡水鱼中隐性孔雀石绿的快速提取和检测方法，首先，快提淡水鱼中孔雀石绿和隐性孔雀石绿，加入硼氢化钾粉末将孔雀石绿转化成隐性孔雀石绿，色谱‑光谱联用采集其多波长色谱数据，经处理得到不含隐性孔雀石绿的本底光谱数据库N，第二，建立隐性孔雀石绿的标准光谱数据库V，第三，快速提取市售淡水鱼样本，加入硼氢化钾粉末后采集样品紫外‑可见光谱c，第四，采用向量‑子空间夹角判据算法快速计算待测样品中隐性孔雀石绿总量。本发明解决了现有孔雀石绿和隐性孔雀石绿提取方法繁琐，操作复杂，提取率低的问题，实现了淡水鱼中隐性孔雀石绿快速检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	广西科技大学
发明人：	刘柳;韦媛媛;徐传杰;忻欣;林华;韩莹;粟晖;董华秀
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910044618.0
公开号：	CN110208441A
代理机构：	北京国坤专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	王峰刚
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	545006 广西壮族自治区柳州市城中区东环大道268号
主权项：	1.淡水鱼中隐性孔雀石绿的快速提取和检测方法，其特征在于，包括：步骤1，将淡水鱼放在含有孔雀石绿的水中培养24h，可食部分去除鱼鳞、鱼皮和骨头，鱼肉中加入乙腈，快速提取，得到含有隐性孔雀石绿和孔雀石绿的样品，加入硼氢化钾粉末将孔雀石绿转化成隐性孔雀石绿；将液相色谱-光谱仪联用，采集完全分离后的多波长色谱数据阵列，扣除待测组分隐性孔雀石绿的色谱数据，得到数据量大的本底数据库B，对B进行主成分分析和奇异值分解降低维度，得到数据量小的本底数据库N；步骤2，建立隐性孔雀石绿标准品数据库V，用分析天平称取隐性孔雀石绿标准品，乙腈溶解，配成标准储备液，再将标准储备液分别稀释成不同浓度的标准品，采集全波长下的紫外-可见光谱数据，经最小二乘回归法得到多波长标准隐性孔雀石绿紫外-可见光谱数据库V；步骤3，取市售鱼肉的可食部分，加入乙腈快速提取得到样品，在样品提取液中加入硼氢化钾粉末，将孔雀石绿完全转化成隐性孔雀石绿，采集待测鱼肉样品全波长下的紫外-可见光谱数据，得到待测鱼肉样品光谱数据库c；步骤4，采用向量-子空间夹角判据方法计算样品的隐性孔雀石绿总含量。 2.根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于：所述本底数据库N的样品为不同品种的多个鱼肉样品，对应的本底数据库N为不同品种的多个鱼肉样品的光谱数据库的集合。 3.根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于，所述向量-子空间夹角判据方法包括： (1)根据定量精度设定扣减步数Δ； (2)在算式yi＝aix+bi中带入较大的x1值，得到v1，yi表示i波长下隐性孔雀石绿的吸光度值，ai、bi指代常数，x表示隐性孔雀石绿的浓度，v1即为浓度为x1下隐性孔雀石绿的多波长吸光度y1，v1是所有yi的值所组成的矩阵； (3)从待测鱼肉样品光谱数据库c中扣除v1/Δ，扣除后的变量记为dc；将本底数据库N和变量dc合并，记为对照空间R，计算对照空间R与v1的夹角； (4)从待测鱼肉样品光谱数据库c中一步一步扣除v1，重复步骤(3)，计算R与v1夹角值； (5)重复步骤(4)，当待测鱼肉样品光谱数据库c中隐性孔雀石绿完全被扣除后，对照空间R和v1的空间夹角会出现最大值θmax，记录θmax出现时所对应的扣减步数λmax，通过隐性孔雀石绿的浓度x1和扣减步数λmax，计算待测鱼肉样品中隐性孔雀石绿的含量y1；计算方法为y1＝x1×λmax/Δ，得到的y1值即为待测鱼肉样品中隐性孔雀石绿的含量，若空间夹角所对应的扣减步数为1，或者空间夹角值随扣减步数单调递增或递减，则样品中不含待测组分隐性孔雀石绿。 4.根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于：所述液相色谱-光谱仪联用中的高效液相色谱的流动相为乙腈:乙酸-乙酸铵缓冲溶液，乙腈:乙酸-乙酸铵体积比为70-80:20-30，pH为4.6。 5.根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于：所述检测方法的隐性孔雀石绿检出限为100μg/kg，0.01μg/mL。 6.根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于：所述快速提取，具体是样品加乙腈后在10000r/min匀浆机中匀浆，加酸性氧化铝(200-300目)净化，然后用快速混匀器振荡，在4000r/min高速离心机离心5min，上清液过0.45um微孔滤膜。 7.根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于：步骤1和步骤3中，1mL 10μg/mL的孔雀石绿可以完全转化成6.5μg/mL隐性孔雀石绿，孔雀石绿的转化当量为0.65，加入过量的硼氢化钾不影响隐性孔雀石绿的含量。 8.根据权利要求1所述的快速提取和检测方法，其特征在于：步骤1和步骤3中，加入硼氢化钾粉末将孔雀石绿转化成隐性孔雀石绿后，样品应进行高速离心，取上清液进行检测。
所属类别：	发明专利