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原文传递磁珠-核酸适配体-多靶分子同时检测的方法及试剂盒

专利名称：	磁珠-核酸适配体-多靶分子同时检测的方法及试剂盒
摘要：	本发明属于分子生物学领域，基于靶分子配体和核酸配基的分子识别，结合磁分离纯化，通过质谱的分子定性定量分析，实现多分子组检测和多功能组信息的统一，能检测出机体或组织的分子组和功能组的相关性。本发明利用磁分离简单完成靶分子组的分离；利用适配体的特异性和高亲和性可有效获得靶分子组；质谱有效的进行多分子的定性定量，实现二次分子检测，提高检测的准确性；多分子的统一定性定量可较真实的反应分子间的相互关系，同时也揭示机体功能的相互关系，利于蛋白质组学和基因组学研究与临床分子检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	甘肃;62
申请人：	廖世奇
发明人：	廖世奇;曾家豫;廖正宇;栗怡;袁红霞;魏正丽
专利状态：	有效
申请日期：	2018-06-08T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-23T00:00:00+0800
申请号：	CN201880003651.2
公开号：	CN110168376A
代理机构：	深圳市韦恩肯知识产权代理有限公司
代理人：	黄昌平
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	730050 甘肃省兰州市小西湖东街2号
主权项：	1.一种磁珠-适配体-多靶分子同时检测的方法，其特征在于，包括下述步骤： (1)孵育：磁珠-适配体和标本一起孵育，形成磁珠-适配体-靶分子复合物； (2)酸洗脱：加入洗脱缓冲液,晃动，收集洗脱液，立即加入内含有检测靶分子的标准肽段的TrisHCL中和； (3)质谱定性定量检测指定的靶分子； (4)通过数据平台分析系统进行分析。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述标本包括血清、尿液、体液，以及细胞和组织悬液中的至少一种。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中的适配体是针对所述标本利用指数富集的配基系统进化技术筛选获得的特异性核酸适配体组。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中酸洗脱分离适配体和靶分子的洗脱效率为98％以上。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述标准肽段是指为准确对指定蛋白肽段进行定性定量，在质谱样本中带进的参照标准肽段。 6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述靶分子是经过实验筛选获得的具有特异性标志的靶分子。 7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)根据检测到的指定蛋白的量效关系而推测功能机制，作出分析报告。 8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述标本通过以下方法制备：按静脉穿刺法采取所需血量，立即卸下针头，将血液注入盛有抗凝剂的试管内，立即轻轻摇动，使血液和抗凝剂混匀，以防血液凝固，然后在3000-6000转/min下离心，分离血清即得。 9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述磁珠-适配体-靶分子复合物通过以下方法形成：将100μL所述标本与50μL所述磁珠-适配体一起37℃孵育30分钟，经3χSSC洗涤一次，20倍体积的0.4mM Binding Buffer洗涤3次，磁分离即得。 10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，包括以下步骤：在步骤(1)所述磁珠-适配体-靶分子复合物中加入0.5ml洗脱缓冲液,晃动1min，收集洗脱液，立即加入250μL、pH为8.0、1M的TrisHCL中和，重复洗脱三次，混合三次洗脱中和液，即得质谱靶分子检测液。 11.一种磁珠-适配体-多靶分子同时检测的试剂盒，其特征在于，包括：试剂1：5-10mL、pH值为7.4的0.01-0.1M磷酸盐缓冲液，内溶50％粒径5-50nm的链霉亲和素琼脂磁珠微粒；试剂2：5-10mL、pH值为7.4的0.4mM1×Binding Buffer缓冲液，内溶有0.003-0.3ug/L生物素化的特异性核酸适配体；试剂3：洗脱缓冲液。 12.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述洗脱缓冲液包括甘氨酸、氯化钠和Tween20。 13.一种磁珠-核酸适配体-质谱多分子检测分析系统，其特征在于，包括：至少一第一试剂，该第一试剂包括表面具有特异性核酸适配体组的磁珠分离载体；至少一第二试剂，该第二试剂包括分子洗脱液；至少一仪器检测平台，该平台包括质谱仪；至少一个数据平台，该平台包括数据分析仪器和相应软件；其中，所述特异性核酸适配体组是针对复合物样品特异性分子筛选出的特异性核酸适配体组，所述磁珠分离载体由所述特异性核酸适配体组包被到磁珠上形成并具特异性结合标志物能力；所述仪器检测平台用于对结合后的磁珠洗涤中和液，经激光解析飞行质谱检测样品中的特定分子的含量；所述数据分析软件用于对质谱检测到的特定靶分子量效关系进行分析，以确定分子相互关系及功能相关性。 14.根据权利要求13所述的磁珠-核酸适配体-质谱多分子检测分析系统，其特征在于，所述特异性核酸适配体组由指数级富集的配基进化系统筛选获得。 15.根据权利要求13所述的磁珠-核酸适配体-质谱多分子检测分析系统，其特征在于，所述质谱仪用于对所述特异性核酸适配体组结合的多靶分子进行定性定量检测。 16.根据权利要求13所述的磁珠-核酸适配体-质谱多分子检测分析系统，其特征在于，该检测分析系统用于对某一疾病和生物功能根据特征分子定性定量检测的量效关系通过自动分析体系给出的分析报告体系。
所属类别：	发明专利