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原文传递基于核酸适配体的肿瘤检测方法及试剂盒

专利名称：	基于核酸适配体的肿瘤检测方法及试剂盒
摘要：	本发明公开了基于核酸适配体的肿瘤检测方法及试剂盒。本发明提供了试剂盒，包括核酸适配体或其衍生物，以及，固定或偶联所述核酸适配体或其衍生物的载体，所述核酸适配体为序列1所示的单链DNA分子。本发明的基于核酸适配体磁性纳米颗粒技术用于外周血中高表达碱性磷酸酶的循环肿瘤细胞、外泌体和自由碱性磷酸酶捕获和检测的方法，可以实现对目标细胞、外泌体或自由蛋白高选择性的捕获及检测。磁性纳米颗粒既可起到尺寸放大作用，用于富集，还可用于磁分离实现高效率捕获。通过利用碱性磷酸酶自身与显色底物的酶反应，对分离得到的目标物进行可视化检测，实现了信号放大，提高了灵敏度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国科学院化学研究所
发明人：	上官棣华;邴涛;沈璐瑶;汪俊彦;肖潇;刘祥军;张楠
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-02T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910001280.0
公开号：	CN109682973A
代理机构：	北京纪凯知识产权代理有限公司
代理人：	关畅;白艳
分类号：	G01N33/574(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100190 北京市海淀区中关村北一街2号
主权项：	1.一种试剂盒，包括核酸适配体或其衍生物，以及，固定或偶联所述核酸适配体或其衍生物的载体，所述核酸适配体或其衍生物为如下1)-7)中任一种： 1)序列1所示的单链DNA分子； 2)将1)所示的核酸适配体删除或增加一个或几个核苷酸，得到与所述核酸适配体具有相同功能的核酸适配体的衍生物； 3)将1)所示的核酸适配体进行核苷酸取代或修饰，得到与所述核酸适配体具有相同功能的核酸适配体的衍生物； 4)将1)所示的核酸适配体的骨架改造为硫代磷酸脂骨架，得到与所述核酸适配体具有相同功能的核酸适配体的衍生物； 5)由1)所示的核酸适配体编码的RNA分子，得到与所述核酸适配体具有相同功能的核酸适配体衍生物； 6)由1)所示的核酸适配体编码的肽核酸，得到与所述核酸适配体具有相同功能的核酸适配体的衍生物； 7)将1)-6)任一所示的核酸适配体的一端或中间接上信号分子和/或活性分子和/或功能基团和/放射性核素，得到与所述核酸适配体具有相同功能的核酸适配体的衍生物。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒具有如下1)-4)中至少一种功能： 1)检测或捕获待测样本中表达或高表达碱性磷酸酶的肿瘤或肿瘤细胞； 2)检测或捕获待测样本中表达或高表达碱性磷酸酶的循环肿瘤细胞； 3)检测或捕获待测样本中表达或高表达碱性磷酸酶的外泌体； 4)检测或捕获待测样本中的可溶性碱性磷酸酶；或，所述核酸适配体的衍生物为去除或改变序列1所示的核酸适配体核苷酸序列自5’端第1个核苷酸起包括5’端第一个核苷酸残基的1-7个核苷酸；和/或，去除序列1所示的核酸适配体的核苷酸序列自3’端第1个核苷酸起包括3’端第一个核苷酸残基的1-7个核苷酸；或所述核酸适配体的衍生物为将序列1所示的核酸适配体核苷酸序列5’端或3’端增加若干个核苷酸或修饰基团且不影响序列1第10-36位形成的结构，保留的核苷酸残基组成的核酸适配体。 3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述核酸适配体的衍生物为如下1)-6)中任一种： 1)序列2所示的单链DNA分子； 2)序列3所示的单链DNA分子； 3)序列4所示的单链DNA分子； 4)序列5所示的单链DNA分子； 5)序列6所示的单链DNA分子； 6)序列7所示的单链DNA分子。 4.根据权利要求1-3中任一所述的试剂盒，其特征在于： 7)所示的核酸适配体衍生物为在1)-6)任一所示的核酸适配体的5’端或3’端标记荧光基团、生物素基团或放射性核素。 5.根据权利要求1-4中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述固定或偶联核酸适配体或其衍生物的载体为纳米颗粒或微米颗粒或芯片。 6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述纳米颗粒为修饰物修饰的纳米/微米颗粒；所述修饰物为链霉亲和素、羧基、氨基或巯基。 7.根据权利要求1-6中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述表达或高表达碱性磷酸酶的肿瘤或肿瘤细胞为人宫颈癌细胞、人乳腺癌细胞、人结直肠癌细胞或人肝细胞癌细胞；或，所述表达或高表达碱性磷酸酶的循环肿瘤细胞为人宫颈癌循环肿瘤细胞、人乳腺癌循环肿瘤细胞、人结肠癌循环肿瘤细胞或人肝细胞癌循环肿瘤细胞。 8.根据权利要求1-7中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括与碱性磷酸酶反应的显色底物；所述显色底物为荧光底物分子、化学发光底物分子或发可见光底物分子。 9.权利要求1-8中任一所述的试剂盒或所述核酸适配体或其衍生物，以及，固定或偶联所述核酸适配体或其衍生物的载体在制备捕获和/或检测待测样本中是否含有表达或高表达碱性磷酸酶的肿瘤或肿瘤细胞的产品中的应用；或权利要求1-8中任一所述的试剂盒或所述核酸适配体或其衍生物，以及，固定或偶联所述核酸适配体或其衍生物的载体在制备捕获和/或检测待测样本中是否含有表达或高表达碱性磷酸酶的循环肿瘤细胞的产品中的应用；或权利要求1-8中任一所述的试剂盒或所述核酸适配体或其衍生物，以及，固定或偶联所述核酸适配体或其衍生物的载体在制备捕获和/或检测待测样本中是否含有表达或高表达碱性磷酸酶的外泌体的产品中的应用；或，权利要求1-8中任一所述的试剂盒或所述核酸适配体或其衍生物，以及，固定或偶联所述核酸适配体或其衍生物的载体在制备捕获和/或检测待测样本中是否含有可溶性碱性磷酸酶产品中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述待测样本为外周血全血或血清或血浆或细胞培养液或唾液。
所属类别：	发明专利