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一种基于多胞嘧啶的核酸适配体检测可卡因的方法
| 专利名称： | 一种基于多胞嘧啶的核酸适配体检测可卡因的方法 |
| 摘要： | 本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于多胞嘧啶的核酸适配体检测可卡因的方法。本发明使用多胞嘧啶修饰可卡因核酸适配体并荧光标记，氧化石墨烯对修饰后的可卡因核酸适配体进行物理性吸附，吐温20去除GO表面对可卡因的吸附，以此来检测可卡因；加入吐温20后荧光恢复明显优于没有加入吐温20时，利用GO吸附具有Poly‑C的可卡因适配体，无需额外化学修饰DNA，还能有效固定DNA进行淬灭，poly‑C修饰的可卡因适配体能有效降低合成成本，方法简单、快速准确且灵敏性高。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 江苏大学 |
| 发明人： | 高力;相文文;时海霞;刘城 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2018-12-20T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-05-07T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201811561006.0 |
| 公开号： | CN109725165A |
| 分类号： | G01N33/94(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 212013 江苏省镇江市京口区学府路301号 |
| 主权项： | 1.一种基于多胞嘧啶的核酸适配体检测可卡因的方法，其特征在于，所述方法包括步骤如下： （1）使用Poly-C以及羧基荧光素对可卡因核酸适配体进行修饰和荧光标记，加入到磷酸缓冲盐溶液中配置成Poly-C可卡因核酸适配体的PBS缓冲液； （2）加入氧化石墨烯对Poly-C修饰及荧光标记后的可卡因核酸适配体的DNA进行淬灭，得到Poly-C-GO可卡因核酸适配体； （4）吐温20修饰后的Poly-C-GO可卡因核酸适配体中加入不同浓度可卡因标准溶液，进行荧光恢复，并测量在520nm处加入可卡因后的荧光强度F； （5）计算加入可卡因前后的荧光增长率F/F0–1，以可卡因标准溶液浓度为横坐标，以荧光增长率为纵坐标，得到可卡因浓度的标准曲线； （6）将待测可卡因样本按照步骤（1）-步骤（4）的方法获得加入待测可卡因后的荧光强度值F'，代入到步骤（5）得到的标准曲线中，获得待测可卡因样本的浓度。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的修饰是对可卡因核酸适配体片段进行Poly-C修饰，Poly-C修饰后的可卡因核酸适配体片段核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述氧化石墨烯的浓度为5-7µg/mL。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，吐温20的浓度为0.01%-1%。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述的荧光恢复温度为室温，时间为20-40min。 6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（5）中，所述标准曲线在0.01-50 nM范围内，线性回归方程为：F/F0=4.54157 C + 0.82081，线性相关系数为0.99263，C为可卡因浓度，单位为nM。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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